コラプシンによる細胞運動抑制とチロシンリン酸化相関の解析

colapsin抑制细胞运动与酪氨酸磷酸化的相关性分析

• 批准号: 11780564
• 负责人: 佐々木 幸生
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11780564/
• 关键词: 成長円錐; セマフォリン; 反発因子; 軸索ガイダンス; 神経発生; チロシンキナーゼ; Fyn; Cdk5; セマホリン; コラプシン; 神経回路網; チロシンリン酸化; プレキシン; ラベンダスチンA

神経ガイダンス分子セマホリン/コラプシンファミリーの1つ、Sema3Aの情報伝達を解明する目的で、成長円錐退縮応答に対する種々の阻害剤の効果を検討した。その中で、チロシンキナーゼ阻害剤ラベンダスチンAとセリン/トレオニンキナーゼであるcyclin-dependent kinase 5(Cdk5)阻害剤オロモウシンが顕著な阻害効果を示すことを明らかにした。また、Sema3A受容体であるプレキシン-A2(Plex-A2)とニューロピリン-1(NP-1)をCOS-7細胞に発現させたところ、Sema3A刺激により細胞の接着面積が縮小し、球状になることを見出した。この形態変化は、ラベンダスチンAで阻害された。また、Srcファミリーの一員であるfynあるいはcdk5欠損マウスにおいてSema3A応答の減弱を見出した。これらの分子間の関係を免疫沈降で解析したところ、Plex-A2とNP-1複合体にFynが結合し、Plex-A2のチロシンリン酸化を引き起こすことを見出した。さらに、FynはCdk5と結合し、Cdk5のTyr#15のチロシンリン酸化を介して活性化を誘導することが明らかとなった。神経細胞内におけるリン酸化を解析するために、種々のリン酸化特異的抗体を用いて染色したところ、Cdk5のTyr#15リン酸化認識抗体はSema3A投与後成長円錐を一過的に濃染した。同時に、微小管結合タンパク質タウのCdk5によるリン酸化部位認識抗体は同様に一過的に濃染した。以上より、Sema3A→Plex-A2/NP-1複合体→Fyn→Cdk5→タウ→細胞骨格の再構成という経路が示唆された。同経路は大脳皮質の層構造の構築に関与するリーリンの情報伝達系に酷似しており、Sema3Aの神経細胞移動・皮質層構造の構築に対する関与が注目される。

To investigate the effects of the protective agents on the growth and development of Sema3A molecules. The cyclin-dependent kinase 5(Cdk5) inhibitor has been shown to have the effect of reducing the toxicity of the enzyme. Sema3A receptor was found in COS-7 cells, and Sema3A receptor was found in COS-7 cells. Sema3A receptor was found in COS-7 cells. The change of morphology is A major obstacle to development. Ma, a member of Src ー, saw the weakening of Sema3A's response due to the loss of cdk5. The molecular relationship between Plex-A2 and NP-1 complex was analyzed and analyzed. In the meantime, Fyn has been shown to bind Cdk 5 to Tyr #15 and to activate Cdk5. In the analysis of intracellular acidification, the specific antibody of Sema3A was stained with Tyr#15 and the specific antibody of Sema3A was stained with Tyr#15. At the same time, the microtubule binding protein was detected by CDK5 and the acidified part of the antibody was detected by CDK5. Sema3A→Plex-A2/NP-1 complex →Fyn→Cdk5→ Tr → re-organization of cytoskeleton The same pathway is related to the structure of the cortical layer, and the information transmission system of Sema3A is similar to that of Sema3A.

项目成果

Aizawa,H.: "Phosphorylation of cofilin, by LIM-kinase is necessary for semaphorin 3A-induced growth cone collapse."Nat.Neurosci.. (印刷中).

Aizawa, H.：“LIM 激酶对丝切蛋白的磷酸化对于 semaphorin 3A 诱导的生长锥塌陷是必要的。”（Nat Neurosci）。

Goshima,Y.: "Growth cone neuropilin-i mediates collapsin/sema III facilitation of antero and retrograde axoplasmic transport."J.Neurobiol.. 39巻4号. 579-589 (1999)

Goshima，Y.：“生长锥神经毡蛋白-i 介导塌陷蛋白/sema III 促进前轴浆和逆行轴浆运输。”J. Neurobiol，第 39 卷，第 4 期。579-589 (1999)

Ito,T.: "Repulsive axon guidance molecule Sema3A inhibits branching morphogenesis f fetal mouse lung."Mech.Dev.. 97巻1-2号. 35-45 (2000)

Ito, T.：“排斥性轴突引导分子 Sema3A 抑制胎儿小鼠肺的分支形态发生。”，第 97 卷，第 35-45 期（2000 年）。

Sasaki,Y,Noda,M,Goshima,Y,Shimonaka,M,Misu,Y: "Possible involvement of tyrosine kinase in collapsin-1-induced growth cone collapse."Jpn J Pharmacol. 79. 261P-261P (1999)

Sasaki,Y,Noda,M,Goshima,Y,Shimonaka,M,Misu,Y：“酪氨酸激酶可能参与 collapsin-1 诱导的生长锥塌陷。”Jpn J Pharmacol。

Goshima,Y.: "Functions of semaphorins in axon guidance and neuronal regeneration."Jpn.J.Pharmacol.. 82巻4号. 273-279 (2000)

Goshima, Y.：“信号蛋白在轴突引导和神经再生中的功能。”Jpn.J.Pharmacol.. Vol. 82，No. 4. 273-279 (2000)