環境有害物質の気道上皮細胞に及ぼすサイトカイン分泌刺激の細胞内情報伝達機構の研究
环境有毒物质刺激气道上皮细胞分泌细胞因子的细胞内信号转导机制研究
基本信息
- 批准号:12770293
- 负责人:
- 金额:$ 1.22万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
- 财政年份:2000
- 资助国家:日本
- 起止时间:2000 至 2001
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
培養皿に気道上皮細胞株A549をsubconfluentな状態に培養し、50μg/mlの濃度のディーゼル排気粒子懸濁液で刺激する。気道上皮細胞からIL-8、GM-CSFなどの炎症性サイトカインの産生が増強し、そのメカニズムの一つとしてNF-κBの活性化がおこっていることは以前より示されているが、ディーゼル排気粒子による刺激では、IL-8の産生は刺激されるにもかかわらず細胞質内でNF-κBと結合しているIκBのリン酸化および分解がおこらない。一方で細胞骨格系に関与するSmall G proteinのRhoAは活性化することによりNF-κBを活性化することが知られており、実際Rhoの活性化、すなわちGDP結合型からGTP結合型への変換、をRhotekinのRho結合ドメイン(主にRhoA、RhoCに結合)による免疫沈降で調べると刺激後2分程度で活性がすみやかに上昇し徐々に減退する。RhoBは同じRhoの中でも逆にNF-κBの活性抑制に働くとされているが今回のアッセイ系では検出されない。同じファミリーに属するsmall G proteinのRac1、Cdc42の活性はPak1のRac1およびCdc42結合ドメインを用いたアッセイ系では活性は上昇しない。おなじ粒子状物質である活性炭ではRhoの活性化は見られない。Rhoは細胞骨格系の維持に必須の蛋白質であり、dominant negativeなRhoの強制発現系は細胞の分裂に影響を及ぼす可能性が高いため、現在A549気道上皮細胞株にTet-off gene expression systemを用いた誘導性の発現を試み、気道上皮細胞におけるRhoAの機能解析が進行中である。
The epithelial cell line A549 was cultured in a subfluent state and stimulated by a suspended particulate at a concentration of 50μg/ml. IL-8 and GM-CSF production in epithelial cells increased, IL-8 production increased, NF-κB activation increased, and IL-8 production increased. One side of the cytoskeleton is related to the activation of RhoA, NF-κB, Rho, GDP-binding, GTP-binding, Rhotekin and Rho-binding, immune sedimentation modulation, and 2-minute increase in activity after stimulation. RhoB is the same as RhoB, and it inhibits NF-κB activity in the middle of RhoB. The activity of Rac1 and Cdc42 in small G proteins of the same species increased when Pak1 and Rac1 were combined with Cdc42. The granular substance activated carbon Rho's activation. Rho has a high probability of producing a protein essential for the maintenance of its cellular skeleton system, and its function analysis in A549 cells is in progress.
项目成果
期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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- 影响因子:0
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- 影响因子:0
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