KATPおよびCaチャネルは心筋細胞のアポトーシスに重要な役割を演ずる。

KATP 和 Ca 通道在心肌细胞凋亡中发挥重要作用。

基本信息

批准号：
12770340
负责人：
土屋邦彦
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Gifu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

(背景)心筋細胞のapoptosisにおいて種々のイオンチャネル、特に電位依存性Caチャネルがその進展に重要な役割を演じるという報告がある。しかしapoptosis誘導細胞においてイオン電流の変化を直接的に捉えた報告は少ない。(目的)1.Fas-ligandあるいはceramideの投与によりapoptosisを誘導したラット心筋細胞を用いて、KATPチャネルおよび電位依存性Caチャネルの変化の有無をパッチクランプ法を用いて明らかにする。2.ApoptosisのブロッカーであるZ-VAD-fmk投与後にKATPチャネルあるいは電位依存性Caチャネルがどのような反応を示すかを検討する。さらに前もってKATPチャネルあるいは電位依存性Caチャネルの抑制及び拮抗薬を投与した際のFas-ligandあるいはceramideのapoptosis誘導率を検討する。(方法)ランゲンドルフ法を用いてラット単離心室筋細胞を作成。この心筋細胞にFas-ligandやceramideを投与してapoptosisを誘導する。Apoptosisの確認は細胞保存液であるKRB溶液の灌流下に光学顕微鏡を用いて細胞の形態変化及びapoptotic bodyの確認により行った。これらのapoptosisが誘導された単離心筋細胞にパッチクランプ法を行い、イオン電流を観察した。(結果)1.KATPチャネルについてapoptosis誘導心筋細胞では通常時や代謝抑制が軽度でもすでに、KATPチャネルはほぼ全開口しており、さらにKチャネル開口薬を投与しても電流量に影響はなかった。2.電位依存性Caチャネルについてapoptosis誘導心筋細胞ではapoptosis非誘導細胞に比し、電位依存性Caチャネルの活性化が非常に困難であり、数少ない活性化された場合には電流量が高度に減少していた。このことはCa電流が過剰に活性化された後のrun-downしたチャネル活性を観察しているものと考えられた。3.Fas-ligandあるいはceramideのapoptosis誘導率についてZ-VAD-fmk投与とverapamilで前処理しておくとFas-ligandとceramideのapoptosis誘導は認められなくなったがglibenclamideの前処理ではapoptosis誘導は同様に認められた。(考察)Fas-ligandとceramideのラット心筋細胞に対するapoptosis誘導には電位依存性Caチャネルが大きく関与しており、KATPチャネルはapoptosis誘導心筋細胞で強く開口していたことからその進展阻止にむしろ働いているのではと考えられた。

（背景）有报道称，各种离子通道，尤其是电压依赖性的CA通道，在其在心肌细胞凋亡中的发展中起着重要作用。但是，很少有报道直接捕获了细胞凋亡诱导的细胞中离子电流的变化。（目的）1。使用通过施用FAS-配体或神经酰胺诱导凋亡的大鼠心肌细胞，将使用贴片夹方法确定KATP通道和电压依赖性CA通道的存在或不存在变化。 2。考虑在给药Z-VAD-FMK后，KATP通道或电压依赖性CA通道是如何响应的，Z-VAD-FMK是凋亡的阻滞剂。此外，将研究对拮抗剂进行抑制KATP通道或电压依赖性CA通道以及FAS-配体或神经酰胺的凋亡诱导率。（方法）使用Langendorf方法制备大鼠分离的心室肌细胞。对这些心肌细胞施用FAS-Figand或神经酰胺，以诱导凋亡。通过使用光学显微镜改变细胞的形态并确认凋亡体的灌注通过灌注（一种细胞保存溶液）的灌注来证实凋亡。诱导这些凋亡的分离的心肌细胞进行贴片夹紧，并观察到离子电流。（结果）1。关于KATP通道：即使凋亡诱导的心肌细胞具有轻度的正常和代谢抑制作用，KATP通道也几乎已经完全开放，即使施用K通道揭幕战药物，也没有对当前量的影响。 2。与无凋亡细胞相比，在凋亡诱导的心肌细胞中，电压依赖性Ca通道的电压依赖性CA通道非常困难，并且在激活时，电流的量显着降低。人们认为这是在过度激活CA电流后对破裂通道活动的观察。 3。当用Z-VAD-FMK给药和Verapamil进行预处理并诱导FAS-Ligand或神经酰胺的凋亡时，不再观察到FAS-Ligand和Ceramide的凋亡诱导，但使用Glibenclamide进行预处理显示出类似的凋亡诱导。（讨论）依赖电压的CA通道与FAS-Ligand和Ceramide在大鼠心肌细胞中诱导凋亡大量参与，并且由于KATP通道在凋亡诱导的心肌细胞中非常开放，因此，人们认为它们实际上可以防止其进步。