ヒト臍帯血由来造血幹細胞への遺伝子導入と血球分化に与える影響

基因转入人脐带血造血干细胞及其对血细胞分化的影响

• 批准号: 12770612
• 负责人: 川野 勧
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770612/
• 关键词: 造血幹細胞; 遺伝子導入

1.造血幹細胞へのレトロウイルスによる遺伝子導入ヒト臍帯血を採取し,赤血球を除去した上でCD34 PE,CD38 FITCにて染色し,フローサイトメトリーにより造血幹細胞の分画としてCD34++CD38-細胞を得た。Nerve growth factor receptor(NGFR)でマークしたMFG vectorを用い,遺伝子導入を行い,以下の4群でNGFRの発現率を比較した。A群:単離直後に硫酸プロタミン存在下に遺伝子を導入B群:SCF+GM-CSF3日間前刺激後に硫酸プロタミン存在下に遺伝子を導入C群:単離直後にフィブロネクチン存在下に遺伝子を導入D群:SCF+GM-CSF3日間前刺激後フィブロネクチン存在下に遺伝子を導入導入効率の値にばらつきが大きく,不安定であった。傾向としてはD群で最も高かったが,導入直後でも30%前後にとどまり,胎児造血幹細胞での値に比べ低い導入率にとどまった。ベクターのロット・管理状況により発現率が安定しなかったようである。2.in vitro培養による分析増殖展開培養を11日21日行った後,フローサイトメトリーにより,各群のマーカー遺伝子のNGFR発現率を測定するとともに,phenotype analysisとしてはCD34(造血幹細胞),GPA(赤血球),CD45(顆粒球),CD41(巨核球),CD15(B細胞),CD56(NK細胞)の発現を各モノクローナル抗体により染色し,各表面抗原の発現率を分析した。増殖展開培養後にはNGFRの発現率は低下し,持続的な発現が得られなかった。3.NOD/SCIDマウスによるアッセイ8〜10週令のマウスをレシピエントとして使用し,350cGyのγ照射を行った上で尾静脈より遺伝子を導入した造血幹細胞を移植した。上記4群を比較するにはいたらなかったがD群の細胞より,NGFR陽性細胞をフローサイトメトリーで集めて移植細胞として使用した。10週間後に骨髄および末梢血細胞を採取し,in vitro培養の際と同様の分析をフローサイトメトリーにより行ったが,現在のところ有意なNGFRの発現はみられていない。

1. The hematopoietic cells were stained by CD34 PE,CD38 FITC staining, and the hematopoietic cells were divided into CD34 + + CD38- cells. Nerve growth factor receptor (NGFR). Please use MFG vector. Please enter the line. The following 4 groups of NGFR will have a higher rate than others. Group A: after SCF+GM-CSF3 pre-stimulation, there is a tail tail in group B: after SCF+GM-CSF3 pre-stimulation, there is a tail in group C: in group D, there is a tail in group D: after SCF+GM-CSF3 pre-stimulation, there is a lead in the rate of entry. There is a lot of unrest. The highest incidence of fetal hematopoiesis in group D was 30%, and the incidence of fetal hematopoiesis was lower than that of fetal hematopoiesis. The rate of stability in the management of the situation is very high. After the colonization was carried out on the 11th and 21st, the 2.in vitro culture was carried out on the 11th and 21st, and the NGFR rates of each group were determined. The CD34 (hematopoietic cells), GPA (red blood cells), CD45 (granulocytes), CD41 (megakaryocytes), CD15 (B cells) were determined. CD56 (NK cell) assay showed that the antibodies were stained and the surface antigens were analyzed. After the colonization was developed and cultivated, the rate of NGFR infection was low, and those who held it showed that they were suffering from infection. 3.NOD/SCID was used to treat hematopoiesis, hematopoiesis, cell transplantation, hematopoiesis, hematopoiesis, hematopoiesis, Group 4