薬剤評価モデルとしてのヒト型造血因子受容体遺伝子導入マウスとその造血幹細胞動態制御

人造血因子受体转基因小鼠作为药物评价模型及造血干细胞动力学控制

• 批准号: 09250220
• 负责人: 井上 達
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: 国立衛生試験所
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09250220/
• 关键词: 遺伝子改変動物; サイトカイン; サイトカイン受容体; サブユニット構造

本研究は大別して、IL-3受容体の遺伝子導入(「卜」)マウスの交配・系統維持、同「卜」マウスの造血幹細胞/前駆細胞の機能アッセイ、同「卜」マウスの諸臓器におけるpleiotropismの解析、等から構成されており、以下に実績の概略を示す。1.交配と系統維持(平林・梅村・井上):既に作製されたヒトIL-3受容体の各サブユニット遺伝子導入マウスのうち、α鎖とβ鎖のマウスの交配により双方の遺伝子導入マウスを得、以下の解析に供した。 尚、それぞれの「ト」マウスはホモ化して維持する計画だったが、現在までにホモ個体を確認するには至らなかった。また、IL-3分泌マウスとの交配実験については、まとまった結果を得るに至らなかった。2.造血幹細胞/前駆細胞の機能アッセイ(平林・横田・井上):(1)α鎖マウスの遺伝子発現:新規市販品の2次抗体を用いることで、骨髄・脾・胸腺細胞の導入遺伝子発現分画をセルソーターで従来より明瞭に示すことが出来た。(2)αβマウス骨髄細胞の反応性:α鎖とβ鎖のマウスの交配により作成した双方の遺伝子導入マウス骨髄細胞は、ヒトIL-3に農度依存性に反応してln vitroコロニーを形成した。形成されたコロニーの約1/4はcompactな形態を示し、表面分化抗原をセルソーターで解析したところ、B220及びCD19が陽性のB細胞系列であることが解った。(3)compact colonyの性状:このcompact colonyはヒトIL-3添加によって二次性コロニーを形成するが、マウスIL-3添加では全く増殖しない。ヒトIL-3にマウスIL-7を添加して二次性コロニーを形成させるとCD43陽性分画が減少し分化傾向が認められた。3.諸臓器におけるpleiotropismの解析(高木・平林・井上):受容体「卜」マウスの諸臓器での導入遺伝子発現をRT-PCR等で観察し、小脳や精巣等にも導入遺伝子の増幅産物を認めた。尚,必要な備品類はほぼ揃っており、「卜」マウスの選別のための遺伝型決定などの効率向上のため卓上微量高速遠心機を充当した。また頭目的のためにアルバイトも依頼した。

In this study, we summarized the following results: mating, system maintenance, function of hematopoietic stem cells/progenitor cells, analysis of pleiotropism, and composition of IL-3 receptor gene transfer. 1. Mating system maintenance (Hirabayashi, Uemura, Inoue): both control and control of IL-3 receptor each vector introduction, alpha lock and beta lock of the vector introduction, the following analysis. The plan is still in progress, and the individual is now confirmed. IL-3 secretion and mating results 2. Hematopoietic stem cell/progenitor cell functional breakdown (Hirabayashi, Yokota, Inoue):(1) α-lock gene development: new market drug secondary antibody use in the middle of the first, bone, spleen, thymocyte gene development analysis of the introduction of the first, clear and clear indication of the second. (2)α β-cell retroactivity: α-lock and β-lock are produced by mating with each other, and IL-3 is produced by retroactivity. About 1/4 of the compact morphology of B-cells was formed, and the surface differentiation antigen was analyzed. B-cells, B220 and CD19 were positive for B-cells. (3) Characteristics of compact colony: The compact colony is not only formed by the addition of IL-3, but also completely propagated by the addition of IL-3. IL-3 and IL-7 were found to be secondary to each other. 3. Analysis of pleiotropism in various organs (Takagi·Hirabayashi·Inoue): Detection of expression of introduced genes in various organs of receptors by RT-PCR, etc., and identification of amplified products of introduced genes in small and fine tissues. In addition, the necessary spare parts are selected according to the type of transmission, and the rate of transmission is determined by the micro high-speed remote control. The chief's name is

项目成果

Trosko JE: "Oxidative stress,signal transduction,and intercellular communication in radiation carcinogenesis." Stem Cells. 15(S2). 59-70 (1997)

Trosko JE：“放射致癌过程中的氧化应激、信号转导和细胞间通讯。”

Inoue T: "Lifetime treatment of mice with azidothymidine (AZT) produces myelodysplasia." Leukemia. 11(S3). 123-127 (1997)

Inoue T：“用叠氮胸苷（AZT）对小鼠进行终生治疗会导致骨髓增生异常。”

Hirabayashi Y: "The p53-deficient hemopoietic stem cells: their resistance to radiation- apoptosis,but lasted transiently." Leukemia. 11(S3). 489-492 (1997)

Hirabayashi Y：“p53 缺陷的造血干细胞：它们对辐射的抵抗力 - 细胞凋亡，但持续时间短暂。”

Yoshida K: "Calorie restriction reduces the incidence of myeloid leukemia induced by a single whole-body radiation in C3H/He mice" Pro Natl Acad Sci,USA. 94. 2515-2519 (1997)

Yoshida K：“热量限制降低了 C3H/He 小鼠单次全身辐射诱发的骨髓性白血病的发病率”Pro Natl Acad Sci，美国。

Yoshida K: "Radiation-induced myeloid leukemia in mice under calorie restriction." Leukemia. 11(S3). 410-412 (1997)

Yoshida K：“热量限制下的小鼠辐射诱发的骨髓性白血病。”