分裂酵母を用いた哺乳動物細胞周期チェックポイントの再構築

使用裂殖酵母重建哺乳动物细胞周期检查点

• 批准号: 13877020
• 负责人: 中西 真
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13877020/
• 关键词: 細胞周期; チェックポイント; Cdc25; 減数分裂; Cds1; Cdc2; 細胞分裂; DNA傷害; 分裂酵母; サイクリン; Cdk2

哺乳動物細胞における細胞周期チェックポイント機構を分裂酵母において再構築するために、分裂酵母におけるDNA複製チェックポイント機構の詳細を解析した。DNA複製チェックポイントはDNA複製が未完了の場合、細胞分裂期への移行を阻害することで染色体を安定に維持する機構であるが、どのような染色体構造を認識しているのかについては全く不明である。我々はOrp1およびCdc18変異体を用いてS期におけるDNA複製チェックポイントおよびDNA傷害チェックポイントを解析した。Orp1pとCdc18pはそれぞれDNA複製阻害時におけるCds1の活性化と維持に必須なタンパク質であることが明らかとなった。このことはDNA複製フォーク構造がCds1活性化に重要な役割を果たしていることを意味していると考えられた。一方、Orp1pとCdc18pのいずれもS期におけるDNA傷害チェックポイントにはほとんど関与していなかった。従って、S期におけるチェックポイント機構においてDNA複製をモニターする機構と、DNA傷害を完治する機構で全く異なっていることが示唆された。これらの知見を踏まえて、まず始めに分裂酵母Cdc2をヒト型Cdc2に置き換えた分裂酵母を作製した。この酵母は野生型に比較して増殖速度が遅く、DNA傷害あるいは複製阻害に対して明らかに感受性が高いため、チェックポイント解析には適さないと判断した。この理由としてCdc2活性を制御する因子群との相互作用が弱いのではないかと考え、現在サイクリンB,Cdc25等をヒト型に置き換えた変異体を作成中である。

In mammalian animals, the cell cycle cycle, the cell cycle, the cell cycle, the cell The DNA copy has not been completed. The DNA copy has not been completed. During the mitotic phase, the migration is blocked, the chromosomes are stable, the chromosomes are not known, and the chromosomes are not known. I use Orp1

项目成果

Burgers, P.M.: "Eukaryotic DNA polymerases : proposal for a revised nomenclature"J. Biol. Chem.. 274. 43487-43490 (2001)

Burgers, P.M.：“真核 DNA 聚合酶：修订命名法的提案”J.

Li, S.F.: "Genomic structure and characterization of the promoter region of the human NAK gene"Gene. 304. 57-64 (2003)

Li，S.F.：“人类 NAK 基因启动子区域的基因组结构和特征”基因。

Touitou, R.: "A degradation signal located in the C-terminus of p21WAF1/CIP1 is a binding site for the C8 a-subunit of the 20S proteasome"EMBOJ.. 20. 2367-2375 (2001)

Touitou, R.：“位于 p21WAF1/CIP1 C 末端的降解信号是 20S 蛋白酶体 C8 a 亚基的结合位点”EMBOJ.. 20. 2367-2375 (2001)

Buscemi, G.: "Nbs1 dependence of Chk2 activation after DNA-damage"Mol. Cell. Biol.. 21. 5214-5222 (2001)

Buscemi, G.：“DNA 损伤后 Chk2 激活的 Nbs1 依赖性”Mol。

Ding, X.: "Different hepatitis B virus genotype distributions among asymptomatic carriers and patients with liver diseases in Nanning, southern China"Hepatology Res.. 22. 37-44 (2002)

丁X.：“南宁市无症状携带者与肝病患者乙型肝炎病毒基因型的不同分布”，肝病研究. 22. 37-44 (2002)