哺乳動物細胞におけるDNA複製および障害チェックポイント機構の解明

阐明哺乳动物细胞中的 DNA 复制和失败检查点机制

• 批准号: 11146217
• 负责人: 中西 真
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11146217/
• 关键词: 細胞周期; チェックポイント; Cdc25; Chk1; Cds1; Cdc2; 細胞分裂; DNA障害

分裂酵母において様々なチェックポイント機構に重要な役割を果たしていると考えられているChk1およびCds1の哺乳動物細胞における作用機構を解明するためにhChk1およびhCDS1の各細胞周期チェックポイントにおけるタンパク質修飾を調べたところ、ヒトChk1はいかなるDNA傷害にも反応せず、その活性に変化を認めなかった。興味あることにヒトChk1はアフィディコリン処理によるDNA複製阻害に反応してリン酸化を受けることが分かった。Cds1はChk1と異なり、正常繊維が細胞およびHeLa細胞においてはすべてのDNA傷害に反応してリン酸化を受けて活性化した。しかしながら、ATM欠失細胞においてはUVおよびMMSによるDNA傷害には反応するが、X線によるものには全く反応しなかった。このことはATM欠損患者の臨床症状とよく一致する。ヒトCds1の発現を各種ガン細胞を用いて調べたところ、p53欠失ガン細胞ではCds1の発現が高く、正常p53を有するものではCds1の発現が非常に低いことが分かった。Cds1の発現はOncoproteinで形質転換すると強く誘導されることが分かった。さらに野生型p53発現アデノウイルスをこれらの細胞に感染させたところ、SV40 largeT抗原およびE6により誘導されたCds1の発現は強く抑制されたがE7により誘導されたものは影響を受けなかった。Chk1ノックアウトマウスの作製とその解析を行ったところ、Chk1ノックアウトマウスは胎生初期に致死的であった。E3.5日卵の解析からChk1ノックアウト卵では異常核を認めた。この異常核はDNA複製阻害において増強されたが、DNA傷害では増強されなかった。哺乳動物細胞においてChk1はDNA複製チェックポイントを、Cds1はDNA傷害チェックポイントをそれぞれ抑制すると考えられた。

The mechanism of action in mammalian cells of Chk1 and CDS1 is explained by the mechanism of action in cell cycles of Chk1 and CDS1. Chk1 is a DNA replication inhibitor. Cds1 is activated in response to DNA damage in Chk1, normal cells and HeLa cells. The DNA damage caused by UV and MMS is reflected by X-ray. The clinical symptoms of patients with ATM deficiency are consistent. Cds1 expression is high in all kinds of cells, and p53 expression is low in all kinds of cells. Cds1 appears in the form of Oncoprotein, which is strongly induced. The expression of wild-type p53 was strongly inhibited by the induction of Cds1 in cells infected with SV40 largeT antigen and E6. Chk1 E3.5 Day egg analysis This abnormal nuclear DNA replication inhibition is enhanced and DNA damage is enhanced. Mammalian cell DNA replication is inhibited by Chk1 and Cds1 DNA damage.

项目成果

Mitsui,K: "A novel human gene encoding HECT domain and RCC1-like repeats interacts with cyclins and is potentially regulated by the tumor suppressor proteins."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 266. 115-122 (1999)

Mitsui,K：“编码 HECT 结构域和 RCC1 样重复序列的新型人类基因与细胞周期蛋白相互作用，并可能受到肿瘤抑制蛋白的调节。”Biochem.Biophys.Res.Commun.. 266. 115-122 (1999)

Kaneko,Y.: "Phorbol ester inhibits DNA damage-induced apoptosis in U937 cells through activation of protein kinase C."Life Science. 65. 2251-2258 (1999)

Kaneko,Y.：“佛波酯通过激活蛋白激酶 C 抑制 U937 细胞中 DNA 损伤诱导的细胞凋亡。”生命科学。

Tominaga,K.: "Role of human Cds1(Chk2) kinase in DNA damage checkpoint and its regulation by p53."J.Biol.Chem.. 274. 31463-31467 (1999)

Tominaga,K.：“人类 Cds1(Chk2) 激酶在 DNA 损伤检查点中的作用及其 p53 的调节。”J.Biol.Chem.. 274. 31463-31467 (1999)

Akita,H.: "Induction of KAI-1 Expression in Metastatic Cancer Cells by Phorbol Esters"Cancer letters. (in press.). (2000)

Akita，H.：“佛波酯在转移性癌细胞中诱导 KAI-1 表达”癌症信件。

Kaneko,Y.: "Cell cycle-dependent and ATM-independent expression of human Chk1 kinase"Oncogene. 18. 3673-3681 (1999)

Kaneko,Y.：“人类 Chk1 激酶的细胞周期依赖性和 ATM 独立表达”癌基因。