核内オーファンレセプターFXRによる脂質代謝調節の解明

阐明核孤儿受体 FXR 对脂质代谢的调节

• 批准号: 13877368
• 负责人: 山添 康
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13877368/
• 关键词: FXR; リトコール酸; sulfotransferase2A; CYP3A; Hepatotoxicity; コレステロール; 胆汁酸

FXR欠損マウスとその野性型マウスにリトコール酸(LCA)を摂取させ、LCA誘発肝毒性に対する感受性を解析した。LCA摂取により雌性マウスではFXR欠損マウスよりもむしろ野性型マウスで高い肝毒性が認められた。肝内総胆汁酸濃度と肝毒性の指標であるアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ(AST)活性の間に高い相関性が認められた。HPLCによる肝内胆汁酸組成の解析により主要胆汁酸はtauroLCAとLCAであることが明らかとなり、これらLCAの蓄積が肝毒性を誘発することが示唆された。肝内LCAの蓄積の原因を明らかにするため、LCAを代謝しその排泄に関与すると考えられる胆汁酸の6位水酸化酵素のCYP3Aと3a位の水酸基の硫酸抱合を触媒するsulfotransferase (ST)2A分子種のタンパクレベルでの発現量およびその活性を測定した。肝ミクロゾーム中でのCYP3A分子種の発現レベルはFXR欠損マウスで有意に高かったが、LCAの6b位の水酸化活性はむしろ野性型で約2倍高いことが明らかとなった。一方肝可溶性画分でのST2AタンパクはFXR欠損マウスでは野性型と比べ5.8倍高く、LCAの3a位の硫酸抱合活性も5.5倍高いことが明らかとなった。またノザンブロツト解析によりFXR欠損マウス肝で野性型マウスに比べ約8倍高いST2AmRNAが検出された。胆汁中の胆汁酸成分の解析の結果、再吸収されにくい硫酸抱合型胆汁酸の量がLCA摂取欠損マウスで野性型マウスに比べ7.4倍高かった。以上の結果より欠損マウスにおいて胆汁酸の硫酸抱合酵素であるST2A含量が高いことが、肝内LCAレベルを減少させ肝毒性を軽減させていることが示唆された。またST2AmRNAレベルはFXR欠損により増加したことより、FXRが直接ST2Aの発現抑制に関与しているのかについて現在検討中である。

FXR owe loss マ ウ ス と そ の wild type マ ウ ス に リ ト コ ー ル acid (LCA) を, take さ せ, LCA 発 lure hepatotoxicity に す seaborne る susceptibility を parsing し た. LCA, take に よ り female マ ウ ス で は FXR owe loss マ ウ ス よ り も む し ろ wild type マ ウ ス で high い hepatotoxicity が recognize め ら れ た. Intrahepatic 総 bile acid concentration と の hepatotoxicity で あ る ア ス パ ラ ギ ン acid ア ミ ノ ト ラ ン ス フ ェ ラ ー ゼ (AST) activity between の に high い phase masato が recognize め ら れ た. HPLC に よ る intrahepatic bile acid composition analytical に の よ り major bile acid は tauroLCA と LCA で あ る こ と が Ming ら か と な り, こ れ ら LCA の accumulation が を induced hepatotoxicity 発 す る こ と が in stopping さ れ た. Intrahepatic LCA の accumulation の reason を Ming ら か に す る た め, LCA を metabolic し そ の discharge に masato and す る と exam え ら れ る bile acid の six acidic enzyme の CYP3A と 3 a bit の water acid radical の hold close を sulfate catalyst す る sulfotransferase Determination of the activity of (ST)2A molecular species タ タ パ レベ レベ で で <s:1> occurrence amount およびそ <s:1> activity を を た In the liver ミ ク ロ ゾ ー ム で の CYP3A molecules of の 発 now レ ベ ル は FXR owe loss マ ウ ス で intentionally に high か っ た が, LCA の 6 b a の water acidification active は む し ろ wild type で about 2 times as high い こ と が Ming ら か と な っ た. A liver soluble draw points で の ST2A タ ン パ ク は FXR owe loss マ ウ ス で は と wild type is higher than 5.8 times べ く, LCA の 3 a bit の looping active も 5.5 times as high sulfate い こ と が Ming ら か と な っ た. ま た ノ ザ ン ブ ロ ツ ト parsing に よ り FXR owe loss マ ウ ス liver で wild type マ ウ ス に than べ about 8 times higher い ST2AmRNA が 検 out さ れ た. Bile の の bile acid composition in parsing の results, then suck 収 さ れ に く い looping type bile acid sulfate の quantity が LCA, take less damage マ ウ ス で wild type マ ウ ス に is higher than 7.4 times べ か っ た. の above results よ り owe loss マ ウ ス に お い て bile acid の sulfate looping enzyme で あ る ST2A content が high い こ と が, intrahepatic LCA レ ベ ル を reduce さ せ hepatotoxicity を 軽 minus さ せ て い る こ と が in stopping さ れ た. ま た ST2AmRNA レ ベ ル は FXR owe loss に よ り raised plus し た こ と よ り, FXR が directly ST2A の 発 now inhibit に masato and し て い る の か に つ い て now 検 please で あ る.

项目成果

M.Miyata: "Relative importance of maternal and embryonic microsomal epoxide hydrolase in 7,12-dimethylbenz [a] anthracene-induced developmental toxicity"Biochem. Pharmacol.. 63. 1077-1084 (2002)

M.Miyata：“母体和胚胎微粒体环氧化物水解酶在 7,12-二甲基苯并[a]蒽诱导的发育毒性中的相对重要性”Biochem。

M.Shimada: "A hydroxysteroid sulfotransferase, St2b2, is a skin cholesterol sulfotransferase in mice"J. Biochem. 131. 167-169 (2002)

M.Shimada：“羟基类固醇磺基转移酶 St2b2 是小鼠皮肤胆固醇磺基转移酶”J.

M.Miyata: "Development of an in vitro system detecting pro-embryotoxin"Jpn. J. Pharmacol.. 89. 320-323 (2002)

M.Miyata：“检测前胚胎毒素的体外系统的开发”Jpn。

M.Miyata: "Suppression of 2-amino-1-methyl-6-phenylimidazo [4,5-b] pyridine-induced DNA damage in rat colon after grapefruit juice intake"Cancer Lette.. 183. 17-22 (2002)

M.Miyata：“摄入葡萄柚汁后大鼠结肠中 2-氨基-1-甲基-6-苯基咪唑 [4,5-b] 吡啶诱导的 DNA 损伤的抑制”Cancer Letter.. 183. 17-22 (2002)

H.Kitada: "Protective role of hydroxysteroid sulfotransferase in lithocholic acid-induced liver toxicity"J. Biol. Chem.. (in press). (2003)

H.Kitada：“羟基类固醇磺基转移酶在石胆酸诱导的肝毒性中的保护作用”J。