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ヒト脳内長鎖cDNA解析データベースを基盤としたマウス扁桃体の情動神経機構の解明

基于人脑长链cDNA分析数据库阐明小鼠杏仁核情绪神经机制

基本信息

批准号：
13878163
负责人：
湯浅茂樹
金额：
$ 1.02万
依托单位：
National Center of Neurology and Psychiatry (2002)Chiba University (2001)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

かずさDNA研究所のヒト脳内長鎖cDNAクローンライブラリーをもとに、そのマウスホモローグであるmKIAAクローンを作成し、これを用いてGST融合蛋白質を作成した。各クローンに対応する蛋白質に対するウサギポリクローン抗体を網羅的、系統的に作成し、マウス成体脳組織切片を用いて間接酵素抗体法による免疫組織化学染色を行ない発現様式のスクリーニングを行なった。約200個のクローンを解析し扁桃体ならびに関連した大脳辺縁系において特徴的な発現を示すものについて、さらに詳しい組織学的解析を行なった。抗体GX05は扁桃体基底外側核並びに海馬CA3のニューロン尖端樹状突起に強い局在性を示し、共焦点レーザー顕微鏡、免疫電顕的に後シナプス樹状突起内の微小管と結合して存在することが明らかになった。また抗体GX35、抗体GX165、抗体D02-1-1ROSは扁桃体中心核に局在し、特にGX35はニューロン尖端樹状突起に強い局在性を示した。さらに、GX50は外側核ではニューロンに、中心核、内側核ではニューロン周辺の構造に局在性を示した。上記のごとく、扁桃体の亜核や細胞内局在について特異性を示す抗体の作成に成功し各クローンの発現様式が明らかとなった。今後、扁桃体各亜核の機能解析、特に特定の亜核に遺伝子を発現させ、あるいは遺伝子発現を抑制する研究への応用が可能となった。ついで、これらのクローンの遺伝子ノックアウトマウスの作成をおこなった。各ノックアウトマウスは正常に出産し成長した。脳組織微細構造と行動異常の解析は現在進行中である。

The DNA Research Institute's long-locked cDNA library was created using GST fusion protein. The protein of each group was detected by indirect enzyme antibody method, and the expression of protein was detected by immunohistochemical method. About 200 tonsils were analyzed, and the development of related features of tonsils was demonstrated. Histological analysis was performed. Antibody GX05 binds to microtubules in the basal lateral tonsil nucleus and the apical dendrites of hippocampus CA3. Antibody GX35, Antibody GX165, Antibody D02 -1-1ROS are located in the central nucleus of tonsil, and GX35 is located in the apical dendrites. In addition, GX50 shows the structure of the outer core, the central core and the inner core. The above notes indicate that the specificity of the tonsil nucleus and tonsil cells has been successfully demonstrated in the production of antibodies. In the future, the function analysis of tonsil nuclei, the discovery of specific nuclei, and the inhibition of their development will be possible.ついで、これらのクローンの遗伝子ノックアウトマウスの作成をおこなった。All of them are growing normally. Analysis of microstructural and behavioral anomalies is ongoing.