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マウス前脳虚血モデルの樹立とRNA干渉を用いた遺伝子導入マウスの作製および解析

RNA干扰小鼠前脑缺血模型的建立及转基因小鼠的产生和分析

基本信息

批准号：
15650067
负责人：
芝崎太
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)マウス前脳虚血モデルの樹立これまで、マウスの前脳虚血モデルを樹立するため様々な検討を行ってきた。本研究では、温度管理のため手術野および手術用顕微鏡をアクリルボードで覆い、全体を37℃に保てるシステムを構築した。さらにはマウス個体間や手術手技自体の誤差をなくすため、赤外線脳血流計を用いて虚血効果を定量化した。これによりさらに虚血の正確性が増した。(2)カルシニューリン活性により制御されるNCX受容体の機能解析海馬のスライスを用いたin vitroの実験系において、CsAおよびFK506の投与により、低酸素刺激による細胞内カルシウム上昇がきわめて効果的に抑制できることが判明した(東京薬科大学、工藤佳久教授との共同研究)。これらの薬剤の共通のターゲットであるカルシニューリンが、カルシウム受容体(細胞膜、または細胞内)を制御していることを示している。現在、遅発性に起こる細胞内カルシウム上昇がNa/Ca exchange transporter(NCX)受容体、特にNCX2受容体がカルシニューリンにより制御されていることが判明しているが。本研究では、虚血による細胞内カルシウムの上昇にこのNCX2受容体が重要な役割を果たしていることが予想されたため、まず、NCXの各サブタイプの抗体を用いて虚血ラット海馬におけるNCXを調べた。NCX1および2は虚血後12-24時間で海馬神経細胞に発現の上昇がみられた。次に、カルシニューリンを含むこれらの遺伝子に対してsiRNAを作製した。まず、カルシニューリンに対するsiRNAは6種類のうち2種類がサブタイプ別に効率よくカルシニューリンを抑制した。さらにNCXに関しては現在作製中である。今後はこれらのsiRNAを用いて培養細胞や遺伝子改変動物(ノックダウンマウス)を作製しさらに解析を進める予定である。

(1)It's the first time I've ever seen you. In this study, we constructed a system for temperature management, surgical field and surgical microscopes. In addition, the measurement of blood flow by infrared ray was quantified. The legitimacy of this kind of false blood has increased. (2)Functional analysis of NCX receptor in vitro, CsA and FK506 administration, and inhibition of intracellular cell growth due to hypoxia stimulation (joint research by Tokyo Pharmaceutical University and Professor Yoshihisa Kudo). This is the first time that a cell membrane or intracellular receptor has been controlled. Now, it is clear that the intracellular concentration of Na/Ca exchange transporter(NCX) receptor, especially NCX2 receptor, is increasing during the development process. In this study, the rise of intracellular protein in the hippocampus and the regulation of NCX2 receptor in the hippocampus were studied. NCX1 and NCX 2 were found in hippocampus neurons 12-24 hours after deficiency of blood. In addition, siRNAs are produced by the expression of genes. SiRNAs are expressed in 6 different types of cells. NCX is now working. In the future, the use of siRNA in cultured cells and modified animals will be further analyzed.

项目成果

期刊论文数量（48）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

T細胞アレルギーによる免疫制御

T 细胞过敏的免疫调节

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
日本臨床 (In press)
影响因子：
0
作者：
Fujii;T.;Onohara;N.;Fukutomi;M.;Nagamatsu;Y.;Naruyama;Y.;Kobayashi;H.;Inoue;R.;Sugimoto;H.;Shibasaki;F.;Nagao;T.;Nishida;M.;Kurose;H;芝崎太
通讯作者：
芝崎太

Calcium Signal-induced Coffilin Dephosphorylation is Mediated by Slingshot via Calcineurin.

钙信号诱导的棺材蛋白去磷酸化是由弹弓通过钙调神经磷酸酶介导的。