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超高感度多項目イムノクロマト法の開発と新型インフルエンザ迅速簡易診断への応用

超灵敏多项目免疫层析方法开发及其在新型流感快速简便诊断中的应用

基本信息

批准号：
21659117
负责人：
芝崎太
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、次世代の汎用的診断技術として、「蛋白バイオマーカーの同時項目分析技術」および「迅速簡易測定技術」を用いて、特に新型インフルエンザを対象とし、簡易型超高感度で型別診断可能なイムノクロマト法の開発を行った。研究期間内に企業との共同研究、共同開発にて以下の項目を達成した。(1)鳥インフルエンザ特異的な単クローン抗体、ウサギポリクローナル抗体をそれぞれ数種類得ることができた。(2)同時多項目分析技術の応用にて蛍光色素増強法「ImpacTag法」を開発(特許申請)し、この技術の応用にて、従来の100倍の高感度化を達成した。(3)参加企業4社により、蛍光検出のための測定機器の開発が開始され、基本仕様が決定。H23年秋までにはA型、B型、H5型の3種類同時測定用のイムノクロマトおよびその測定機器のプロトタイプ完成予定で現在開発を進めている。(4)MUSTagアッセイにおける超高感度試薬の開発:本研究にて、磁気ビーズ系を用いたアッセイ系の検定を行い、従来より約10倍の高感度化が成功した。また、血清サンプルなどでの擬陽性が効果的に防ぐことが出来ることが判明した。これにより、3Plex以上の正確なアッセイが行うことが可能となった。ただ、測定時間に関しては短縮できず、更なる改良が必要である。(5)MUSTagイムノクロマトの研究開発:イムノクロマト様のメンブレン上の展開によるサンドイッチアッセイとし、さらにそのまま同じメンブレン上でオリゴの等温増幅を行い、光学的に検出可能となった。蛍光標識したMUSTagオリゴ抗体を用いて、蛍光イムノクロマト法に応用し、高感度化を検討した結果、メンブレンによるバックグラウンドがかなり高く、更なる改良が必要であることが判明した。

This study is aimed at developing a new type of diagnostic technique, namely, a new type of protein simultaneous analysis technique and a new type of rapid and simple detection technique, which are widely used in the next generation. During the study period, the following projects were achieved through joint research and development among enterprises. (1)The number of types of antibodies that are specific to birds and animals is different. (2)At the same time, the ImpacTag method was developed for the application of multi-item analysis technology, and the 100-fold high sensitivity of this technology was achieved. (3)To participate in the enterprise 4, the development of the measurement machine is started, and the basic specifications are determined. In the autumn of H23, the development of A measuring machine for simultaneous determination of three types of A, B and H5 was completed. (4) The development of MUSTag ultra-high sensitivity test: In this study, the magnetic resonance system was successfully tested and the sensitivity was increased by about 10 times. The results of the test showed that there was no positive reaction in the serum. The correct line is possible if you have more than 3Plex. The measurement time is shortened and improved. (5) The research development of MUSTag: the development of MUSTag: The light identification method is used to detect the high sensitivity of the antibody, and the light identification method is used to detect the high sensitivity of the antibody.