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新規EBウイルスレセプターの性状解析

新型 EB 病毒受体的表征

基本信息

批准号：
15659108
负责人：
吉山裕規
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659108/
关键词：
EBウイルスウイルス感染レセプター上皮細胞 CD21

项目摘要

EBウイルス(EBV)は唾液を介してBリンパ球に感染し、潜伏感染する。潜伏感染したEBVは、宿主の免疫応答によるBリンパ球の活性化に伴い、再活性化する。Bリンパ球から放出されたEBVは上皮細胞に感染し、上皮細胞での増殖を経て、唾液中に放出される。Bリンパ球へのEBV感染はBリンパ球特異的に発現するCD21をレセプターとしてEBVのgp350をリガンドとして成立する。上皮細胞へのEBVの感染機構については、殆ど何もわかっていなかった。しかし、申請者らは薬剤マーカーを組み込んだEBVを用いて、CD21陰性のAGS胃上皮細胞にEBVを感染させることに成功した。次に、CD21陰性であるAGS胃上皮細胞のcDNAライブラリーをイヌのMDCK細胞に導入発現させた後に、ネオマイシン耐性遺伝子とGFP遺伝子を組み込んだEBVを感染させ、PCR法を用いて、ネオマイシン耐性MDCK細胞クローン中のcDNAを増幅し、遺伝子を同定した。本研究では、同定された新規EBVレセプター遺伝子の性状解析等を行った。新しいレセプター遺伝子を100%発現するMDCK細胞を作製し、GFP遺伝子を組み込んだEBVを感染させて、GFP陽性細胞数を測定し、EBV感染効率を調べる実験により、新しいレセプターはCD21に較べてEBVに対する親和性が100分の1以下であることが明らかとなった。また、新規レセプターとIgGのFc部分との融合蛋白質による中和実験を行い、感染がブロックされることが確認された。現在、レセプターに対するEBVリガンドも決定する。gp85、gp25等のエンベロープ遺伝子のノックアウトEBVを作製し、AGS細胞への感染性を確認することにより、EBVリガンド分子の決定を行なっている。

EB virus infection (EBV) is transmitted by saliva. Latent infection with EBV is associated with activation and reactivation of the virus in the host immune response. EBV is released from epithelial cells, epithelial cells, and saliva. EBV infection in B cells is associated with the development of CD21 and EBV gp350 in B cells. Epithelial cells are infected with EBV. EBV infection in CD21 negative gastric epithelial cells In addition, CD21-negative AGS gastric epithelial cells were introduced into MDCK cells, and the expression of CD21-resistant genes and GFP genes were detected. This study was conducted to analyze the characteristics of EBV genes. MDCK cell production with 100% expression of new GFP gene, EBV infection rate, EBV infection rate, CD21 affinity with new GFP gene The Fc part of the IgG was identified as a fusion protein. Now, the EBV is ready. gp85, gp25, etc., and the determination of EBV genes.