Importance of cell differentiation and lytic viral replication in EBV-related epithelial tumor formation

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Epstein-Barrウイルス(EBV)感染によって起こる上皮細胞の腫瘍形成機構の研究を行なった。初代鼻咽頭粘膜細胞にEBVを感染させ３次元培養すると、細胞の分化に伴い溶解感染が起き、細胞の移動性が高まった。これより、上皮細胞の分化はEBVの溶解感染を誘導し、細胞の腫瘍化を促す可能性があると考えた。これまでの研究で、分化度の異なる口腔扁平上皮細胞株にEBVを感染させると、持続感染細胞中に潜伏感染しているウイルスゲノム数の多少とは無関係に、溶解感染を起こし持続感染細胞を樹立できないものと、BART microRNAを高発現し、持続感染細胞を樹立できるものに分かれた。BARTmicroRNAが上皮間葉転換に重要であると考えられた。本年度は、胃上皮細胞を用いて、非感染細胞に比べて、EBV感染細胞を選択的に障害する抗腫瘍剤の研究を行った。非感染細胞に比べて、EBV感染細胞が、ブレオマイシンとその誘導体であるゼオシンに感受性が高いことを発見した。ブレオマイシン/ゼオシンがDNA損傷応答(DDR)を介してEBV陽性胃癌細胞株優位に細胞死を誘導する分子メカニズムを調べた。 BZLF1欠損EBV に感染した胃癌細胞では、細胞障害性の増加は観察されなかった。ゼオシン処理は、非感染細胞よりもEBV感染細胞でp-γH2AXをより強く誘導した。ゼオシン処理はまた、非感染細胞と比較して、EBV感染細胞におけるアネキシンV陽性細胞の数および切断されたカスパーゼ-3の発現を増加させた。さらに、ゼオシン処理は、EBV 感染細胞における BZLF1 発現を増加させ、感染性ウイルスを培養上清に放出した。これらの結果から、ブレオマイシン/ゼオシンが、EBV 溶解感染とその後のカスパーゼ 3 依存性アポトーシスを介して、DDR および EBV 陽性細胞特異的な宿主細胞死を誘導することが考えられた。