EBウイルスベクターを用いたエイズワクチンに関する研究

利用EB病毒载体进行艾滋病疫苗的研究

• 批准号: 07277214
• 负责人: 吉山 裕規
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07277214/
• 关键词: EBウイルス; エイズ; ワクチン; 遺伝子治療; ウイルスベクター

われわれは世界で初めてEBV増殖に許容性の細胞を分離し、EBVベクターによる遺伝子導入法を確立した。本研究の目的は、この新たに確立したEBVベクター系を用いてHIV特異的CTLを誘導し、エイズに対する特異的免疫療法を開発することである。今年度は以下の研究を行った。1.HIVのevn遺伝子を組み込んだEBVの作製:HIVのNL4-3株のevn遺伝子とネオマイシン抵抗性遺伝子をEBV DNAのBamHI-I_1/W_1領域へ組み込んだプラスミドを作製した。次いで本プラスミドをEBV陰性B細胞株BJABヘトランスフェクトし、HIV env蛋白質が発現することをHIV感染者血清を用いた蛍光抗体法により確認した。現在、本プラスミドを組み込んだEBVを作製中である。2.HIVのほぼ全ゲノム(HIV粒子ができないようにパッケージングシグナル、LTRの一方を欠失させたもの)及びネオマイシン抵抗性遺伝子をEBV DNAのBanHI-I_1/W_1領域へ組み込んだプラスミドの作製を試みた。しかし挿入するDNAが10kbpと大きいためかクローニングはできても大量増殖を行うと挿入DNAが抜けてしまい上手くいかなかった。現在、ベクターを変更して引き続きクローニングを試みている。

我们是世界上第一个分离出可用于EBV增殖的细胞，并使用EBV载体建立了转基因基因的方法。这项研究的目的是使用这种新建立的EBV矢量系统诱导HIV特异性CTL，并为艾滋病开发特定的免疫疗法。今年，我们进行了以下研究：1。具有HIV EVN基因的EBV：创建了质粒，其中HIV的NL4-3的EVN基因和新霉素抗性基因被纳入EBV DNA的BAMHI-I_1/W_1区域。然后用EBV阴性B细胞BJAB转染该质粒，并使用HIV感染者的血清通过荧光抗体法证实了HIV ENV蛋白的表达。目前，正在生产EBV，并结合这种质粒。 2。我们试图创建一种质粒，该质粒几乎整个HIV基因组（包装信号和LTR之一，以防止HIV颗粒能够这样做）和Neomycin耐药基因中EBV DNA的BANHI-I_1/W_1区域。但是，也许是因为插入DNA在10kbp时很大，因此可以克隆，但是当执行大量生长时，插入的DNA被去除并且无效。目前，矢量正在改变，并继续尝试克隆。

项目成果

Yoshiyama.H.,Shimizu,N.and Takada,K.: "Peresistent Epstein-Barr virus infection in a human T-cell line : unique program of latent virus expression." The EMBO Journal. 14. 3706-3711 (1995)

Yoshiyama.H.、Shimizu,N. 和 Takada,K.：“人类 T 细胞系中持续的 Epstein-Barr 病毒感染：潜在病毒表达的独特程序。”