权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

ポドサイトの細胞認識と形態調節機能から探る腎糸球体硬化症発症の分子機構

从足细胞识别和形态调节功能探讨肾小球硬化发生的分子机制

基本信息

批准号：
15659203
负责人：
土井俊夫
金额：
$ 2.11万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659203/
关键词：
ポドサイト腎ネフローゼ遺伝子変異

项目摘要

【背景】家族性ネフローゼ症候群の遺伝子解析によって、現在まで2つの疾患遺伝子NPHS1(ネフリン)、NPHS2(ポドシン)が同定されている。これらはいずれも、ポドサイトスリット膜に限局して発現していること、特殊な脂質マイクロドマインに存在していることなどの共通点がある。ポドシンは、ストマチン関連蛋白で、ラフトマイクロドメインを形成するScaffolding(足場)蛋白と推測されているが詳細は不明である。【目的】本研究では、ポドシンの結合蛋白を酵母2ハイブリット法でスクリーニングすることで、スリット膜に形成される蛋白複合体の性状を明らかにし、ネフローゼ症候群発症の鍵となる分子の同定を試みる。【結果】Bait-Preyの相互作用をProQuest Syetemを用いて解析した(Invitrogen)。ラット糸球体を単離した後、mRNAを抽出し、サイズ分画2-4kbのcDNAライブラリーを作成し、pDEST22 preyベクターに挿入した(Gal 4ADとの融合蛋白)。ポドシンのC端100 bpをpDEST32 baitベクターにサブクローニングした(Gal4DBDとの融合蛋白)。BaitとpPC86ベクターで指示酵母MaV203を形質転換し至適3AT濃度(10mM)を決定した。次に、一次スクリーニングとして100万クローンのラージスケールでMaV203をトランスフォームし、3ATプレートに生育した36クローンを選択した。現在2次スクリーニングとして、β-Gal,5FOA, Uraで選択を行っている。【考察】ポドシン結合蛋白の同定は疾患の発症機序解明に大きく貢献すると考えられる。今後酵母の実験系で得た相互作用を、真核生物やin vivoで検証することや、実際のヒトネフローゼ患者でどうなっているかを検討する必要がある。

Background: The genetic analysis of familial reproductive syndrome (FRS) and the genetic analysis of two FRS genes, NPHS1 and NPHS2, have been identified. The common point of these two kinds of lipids is that they exist in different ways. Scaffolding(foot field) protein formation is presumed to be the most complex of the following: [Objective] To investigate the molecular identity of protein complexes formed by protein binding protein in yeast 2 and protein binding protein in yeast 2. [Results] Bait-Prey interaction was analyzed by ProQuest Sytem (Invitrogen). After the fusion protein was isolated, mRNA was extracted, and a 2-4kb cDNA fragment was prepared. pDEST22 was inserted into the fusion protein (Gal4AD). The C-terminal 100 bp of pDEST32 bait of pDEST32 was selected as the fusion protein of Gal4DBD. Bait pPC86 is the indicator yeast MaV203 that is qualitatively transformed to an appropriate 3AT concentration (10mM). Next, a list of 1 million entries, MaV203, 3AT, 36 entries. Now 2 times, select the line, β-Gal,5FOA, Ura. [Investigation] The identification of protein binding proteins and their contribution to the pathogenesis of diseases In the future, it is necessary to investigate the interaction between yeast and eukaryote in vivo and in real life.