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腎特異的な形質変換規定因子のクローニングと機能解析

肾脏特异性转化决定因子的克隆和功能分析

基本信息

批准号：
17659257
负责人：
土井俊夫
金额：
$ 2.11万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659257/
关键词：
メサンギウム細胞形質変換 bHLH型転写因子 Id2 smooth muscle αactin

项目摘要

糖尿病性腎症や慢性糸球体腎炎におけるメサンギウム細胞の形質変換は病変形成における最も重要な問題であるにも関わらず、その誘導因子は同定されていなかったが、yeast two-hybrid screening法を用い、Id2およびE蛋白質をbaitとして、新たなbasic helix-loop-helix (bHLH)型転写因子を修飾する数種類の因子をクローニングした。その全長cDNAをRACE法にて取得した。得られた因子が、同細胞でタンパク質レベルで発現することを各因子特異的抗体を用いたImmunoblotで明らかとした後、Id2およびE蛋白質との結合を免疫沈降法などで確認した。各因子とEタンパク質との結合部位を確定するため、さまざまなtruncated proteinを発現するconstructを作成し、免疫沈降法を行った。また、bHLH型転写因子は細胞周期調節機能も有しているため、BrdU proliferation assay, WST assayなどにより、これら因子が同細胞の増殖を調節する機構を明らかにした。この作用は細胞周期関連タンパクであるP21を介した作用であることをpromoter assayにより見いだした。さらに、代表的な増殖性腎炎モデルである、Thy1腎炎ラットを作成し、これら因子の腎糸球体内での発現が形質変換のマーカーであるsmooth muscle α actin (SMA)に一致してみられることが明らかとなった。また、これら因子のうち少なくとも一つは、われわれが先に解明した糸球体硬化の責任因子であるSmad1に直接結合し、その活性化を調節することも示した。

In diabetic nephropathy and chronic glomerulonephritis, the most important issue in the development of the disease is the change of cell morphology, the change of induction factors and the change of protein baits. In the past two-hybrid screening method, Id2 and E protein baits were used. The new basic helix-loop-helix (bHLH)-type transcription factors were modified by several factors. Full length cDNA was obtained by RACE. The binding of F2 protein to F2 protein was confirmed by Immunoblot. The binding site of each factor is determined by the method of immunosedimentation, and the construction of truncated protein is performed. BHLH-type transcription factors have the function of cell cycle regulation, BrdU proliferation assay, WST assay, BHLH-type transcription factors have the function of cell cycle regulation. This action is related to the cell cycle. The expression of smooth muscle alpha actin (SMA) in the kidney is consistent with that of the proliferative nephritis. For example, the first time in the past, the first time in the past, the second time in the past, the third time in the past, the fourth time, the fourth time in the past, the fourth time in the past, the fourth time, the fourth time, the fourth time in the fourth time, the fourth time in the fourth time, the fourth time, the fourth time,

项目成果

期刊论文数量（4）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Expression of Smadl is directly associated with glomerulosclerosis in diabetic nephropathy.

Smadl 的表达与糖尿病肾病中的肾小球硬化直接相关。

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
Lab Invest 86
影响因子：
0
作者：
Hasegawa M.;et al.;Arai H;Matsubara T
通讯作者：
Matsubara T

Angiotensin II-dependent Src and Smadl signaling pathway is crucial for the development of diabetic nephropathy

血管紧张素II依赖性Src和Smadl信号通路对于糖尿病肾病的发生至关重要

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
Lab Invest Vol.86No.1
影响因子：
0
作者：
Mima A;Matsubara T;Arai H;Abe H;Nagai K;Kanamori H;Fukatsu A;Salant DJ;Fukatsu A;Kita T;Doi T
通讯作者：
Doi T

Genetic and clinical features of 15 Asian families with steroid-resistat nephrotic syndrome.

15 个亚洲类固醇抵抗性肾病综合征家族的遗传和临床特征。