Hammer-head型リボザイムによる遺伝子発現抑制の腎疾患への応用

锤头核酶基因表达抑制在肾脏疾病中的应用

• 批准号: 11877175
• 负责人: 土井 俊夫
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877175/
• 关键词: リボザイム; メサンギウム細胞; 糖尿病; 糖化終末産物; RAGE; IV型コラーゲン; HSP47; 糖尿病腎症

腎糸球体硬化症は腎不全に陥る病態の中で最も重要なものであり、糖尿病性腎症や慢性腎炎など多くの疾患で示す病理所見である。この糸球体硬化症に対して新たな治療法の開発を目的とし、特にリボザイム法をほ乳細胞へ応用し病態抑止の効果を明らかにする。糖尿病合併症は糖化終末産物(AGE)が重要な増悪因子であり、その受容体(RAGE)を介して病態が進行していくと考えられる。従って抑止する分子として(RAGE)をtargetとし、このRAGEに対するhammerhead型リボザイムを形成し、腎メサンギウム細胞に導入し、その抑止効果の持続を検討する。一般にアンチセンスは一過性の発現のみであるので、臨床応用は難しく、腎障害における効果が期待できなので、その効果を持続させる必要がある。その目的でhammerhead型リボザイムを用い、細胞に導入し細胞内in vivoで転写させ、RNA合成を阻害させる。Target分子であるRAGEに対してメサンギウム細胞における発現抑制効果を検討した。発現抑制細胞でどれくらいの期間効果が持続するのか検討し、その抑制持続機序を解明した。他の遺伝子に対する影響も検討した。Mammalian細胞にhammerhead型リボザイムを導入し、効果をみることができた。これは持続的に抑制効果を示す事も証明できた。さらにAGE刺激での細胞外基質産生の増強効果の抑制を証明できた。IV型コラーゲンは細胞外基質の主成分であり、その制御は糖尿病性腎症の進展予防における鍵となると考えられる。本研究ではAGE-RAGE系、IV型コラーゲンおよびその分子シャペロンであるHSP47の重要性を明らかにするものであり、リボザイム法はこれらの因子解明に大きな威力を示すことが明らかとなったが、腎疾患への応用へは今後の詳細な検討が必要である。

Renal si sphere sclerosis は renal insufficiency に 陥 る pathological の で も most important な も の で あ り chronic nephritis, diabetic kidney disease や な ど more く の disorders で す pathology seen in で あ る. こ の si sphere sclerosis に し seaborne て new た な therapy の open 発 を purpose と し, に リ ボ ザ イ ム method を ほ breast cells へ 応 with し pathological dampening の unseen fruit を Ming ら か に す る. Diabetes complications は glycosylated end products (AGE) が important な raised 悪 factor で あ り, そ の by let body (RAGE) を interface し て pathological が for し て い く と exam え ら れ る. 従 っ て dampening す る molecular と し て (RAGE) を target と し, こ の RAGE に す seaborne る type hammerhead リ ボ ザ イ ム を し, renal メ サ ン ギ ウ ム cells に import し, そ の dampening unseen fruit の hold 続 を beg す 検 る. General に ア ン チ セ ン ス は transient の 発 is の み で あ る の で, clinical 応 は difficult し く, renal handicap of に お け る unseen fruit が expect で き な の で, そ の unseen fruit を hold 続 さ せ る necessary が あ る. そ の purpose で type hammerhead リ ボ ザ イ ム を に い, cells with import し cells in vivo で planning write さ せ, RNA synthesis を resistance against さ せ る. The Target molecule であるRAGEに exerts inhibitory effects on を検 てメサ ギウム ギウム cells における and を検 on た た. 発 now inhibit cell で ど れ く ら い の during working fruit が hold 続 す る の か beg し 検, そ の inhibit the 続 machine sequence を interpret し た. His cultural heritage 伝 son に has an impact on する 検 on た た. Mammalian cells にhammerhead type リボザ をみる ムを ムを introduction リボザ effect をみる た とがで た た た. The に inhibitory effect of 続 held by に れ を shows す and <s:1> proves で た た. Youdaoplaceholder0 AGE stimulates the extracellular matrix of で <e:1> to produce <s:1> enhancement effect <s:1> inhibition を proves that で た た た. Type IV コ ラ ー ゲ ン は extracellular matrix の principal component で あ り, そ の suppression は の diabetic kidney disease progress to prevent に お け る key と な る と exam え ら れ る. This study で は AGE - RAGE, type IV コ ラ ー ゲ ン お よ び そ の molecular シ ャ ペ ロ ン で あ る HSP47 の importance を Ming ら か に す る も の で あ り, リ ボ ザ イ ム method は こ れ ら の factor to interpret に big き な を shown powerful す こ と が Ming ら か と な っ た が, kidney disorders へ の 応 with へ は future の detailed な 検 beg が necessary で あ る.

项目成果

Imabayashi,T,: "Expression of basic helix-loop-helix proteins in the glomerule"Clinical Nephrology. 55. 53-58 (2001)

Imabayashi，T，：“肾小球中碱性螺旋-环-螺旋蛋白的表达”临床肾病学。

Mizuno A,Noma Y,Kuwajima M,Murakami T,Zhu M,Shima K: "Chenges in islet capillary angioaiditecture coincide with impaired B-cell function"Metabolism. 48. 477-473 (1999)

Mizuno A，Noma Y，Kuwajima M，Murakami T，Zhu M，Shima K：“胰岛毛细血管血管结构的变化与 B 细胞功能受损相一致”代谢。