课题基金 / 基金详情

小胞体における蛋白質膜透過の一分子観察

小胞体における蛋白質膜透過の一分子観察
内质网蛋白质膜渗透的单分子观察
批准号：
16657044
负责人：
阪口 雅郎
金额：
$1.92万
依托单位：
University of Hyogo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
2004 至 2005
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16657044/
关键词：
生体膜オルガネラシグナル配列トポロジー膜蛋白質生合成

项目摘要

项目成果

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中文摘要
翻译
真核細胞の小胞体では、さまざまな蛋白質が膜を透過し、膜蛋白質が膜に組み込まれている。このダイナミックなプロセスにはトランスロコンと呼ばれるポリペプチド鎖膜透過チャネルが関わっている。トランスロコンはきわめて多種類の蛋白質ポリペプチド鎖を容易に膜透過させるという驚異的な作用をもつ。本研究は小胞体トランスロコンにおけるポリペプチド鎖の移動透過過程を一分子レベルで観察し、透過の経時変化、移動速度、移動頻度、方向性などを測定可能とすることを目指した。高純度で高い蛋白質膜透過活性を有する小胞体膜標品の取得、ウサギ網状赤血球溶血液を用いた高効率タンパク質合成系の大量調整を行った。さらに、われわれの発見した1型シグナルアンカー配列のアミノ末端側にジヒドロ葉酸還元酵素(DHFR)ドメインを融合した場合、高効率で膜透過できること、この透過が特異リガンドであるメトトレキセートを添加することによって完全に抑制されること、このリガンドを除去することによって高効率で膜透過を再開できること、この過程には熱ショック関連蛋白質や燐酸高エネルギー化合物は不要なことを明らかにした。さらに、より制御しやすいポリペプチド鎖膜透過制御実験系を確立し、小胞体トランスロコン内には複数のシグナル配列と複数の親水性膜透過途上セグメントが収容されること、膜透過制御要因であるポリペプチド鎖上の正荷電アミノ酸残基が予想外に長距離での効果を発揮できことなどを明らかにしつつある。
英文摘要
真核細胞の小胞体では、さまざまな蛋白質が膜を透過し、膜蛋白質が膜に組み込まれている。このダイナミックなプロセスにはトランスロコンと呼ばれるポリペプチド鎖膜透過チャネルが関わっている。トランスロコンはきわめて多種類の蛋白質ポリペプチド鎖を容易に膜透過させるという驚異的な作用をもつ。本研究は小胞体トランスロコンにおけるポリペプチド鎖の移動透過過程を一分子レベルで観察し、透過の経時変化、移動速度、移動頻度、方向性などを測定可能とすることを目指した。高純度で高い蛋白質膜透過活性を有する小胞体膜標品の取得、ウサギ網状赤血球溶血液を用いた高効率タンパク質合成系の大量調整を行った。さらに、われわれの発見した1型シグナルアンカー配列のアミノ末端側にジヒドロ葉酸還元酵素(DHFR)ドメインを融合した場合、高効率で膜透過できること、この透過が特異リガンドであるメトトレキセートを添加することによって完全に抑制されること、このリガンドを除去することによって高効率で膜透過を再開できること、この過程には熱ショック関連蛋白質や燐酸高エネルギー化合物は不要なことを明らかにした。さらに、より制御しやすいポリペプチド鎖膜透過制御実験系を確立し、小胞体トランスロコン内には複数のシグナル配列と複数の親水性膜透過途上セグメントが収容されること、膜透過制御要因であるポリペプチド鎖上の正荷電アミノ酸残基が予想外に長距離での効果を発揮できことなどを明らかにしつつある。
期刊论文(20)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Translocation of a long amino-terminal domain through ER membrane mediated by following signal-anchor sequence
由以下信号锚定序列介导长氨基末端结构域通过内质网膜的易位
DOI： --
发表时间： 2005
期刊： EMBO J. 24
影响因子： --
作者： [Kida, Y. et al.]
通讯作者： Y. et al.
Function of positive charges following signal-anchor sequences during translocation of the N-terminal domain
DOI： 10.1074/jbc.m506613200
发表时间： 2006-01-13
期刊： JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
影响因子： 4.8
作者： [Kida, Y, Morimoto, F, Sakaguchi, M]
通讯作者： Sakaguchi, M
Manipulation of membrane protein topology on the endoplasmic reticulum by a specific ligand in living cells
通过活细胞中的特定配体操纵内质网上的膜蛋白拓扑
DOI： --
发表时间： 2005
期刊： J.Biochem. 138
影响因子： --
作者： [Ikeda, M. et al.]
通讯作者： M. et al.
Topogenic properties of transmembrane segments of Arabidopsis thaliana NHX1 reveal a common topology model of the Na+/H+ exchanger family.
DOI： 10.1093/jb/mvi132
发表时间： 2005-10
期刊： Journal of biochemistry
影响因子： 2.7
作者： [Yoko Sato;M. Sakaguchi]
通讯作者： Yoko Sato;M. Sakaguchi
共 9 条
    Functional analysis of translocon factors involved in the topogenesis of membrane proteins
    • 批准号：
      20K06510
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
    • 资助金额：
      $2.75万
    • 财政年份：
      2020
    • 负责人：
      阪口 雅郎
    • 依托单位：
      University of Hyogo
    膜タンパク質の生合成と構造形成プロセス
    • 批准号：
      18031031
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
    • 资助金额：
      $7.81万
    • 财政年份：
      2006
    • 负责人：
      阪口 雅郎
    • 依托单位：
      University of Hyogo
    ミトコンドリア膜蛋白質の選別輸送と構造変換機構
    • 批准号：
      17048027
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
    • 资助金额：
      $4.03万
    • 财政年份：
      2005
    • 负责人：
      阪口 雅郎
    • 依托单位：
      University of Hyogo
    膜タンパク質のオルガネラ標的化とトポロジー構築
    • 批准号：
      17028049
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
    • 资助金额：
      $5.12万
    • 财政年份：
      2005
    • 负责人：
      阪口 雅郎
    • 依托单位：
      University of Hyogo
    海外基金