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ミトコンドリア膜蛋白質の選別輸送と構造変換機構

线粒体膜蛋白的选择性转运和结构转化机制

基本信息

批准号：
17048027
负责人：
阪口雅郎
金额：
$ 4.03万
依托单位：
University of Hyogo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17048027/
关键词：
生体膜オルガネラシグナル配列トポロジー膜蛋白質生合成

项目摘要

膜蛋白質の細胞内局在化,ミトコンドリア内での仕分け,膜内構造形成過程におけるソフトな相互作用の解明を目的として下記の成果をあげた。【1】膜蛋白質に特化したミトコンドリア指向性シグナル配列の解析。ミトコンドリア内膜に存在するABC輸送体(ABCme ; ABCB10アイソフォーム)のアミノ末端には,105残基の膜蛋白質に特化したミトコンドリア標的化シグナル配列が存在する。その構造解析を目指して大腸菌での発現系を設定した。発現したものは封入体となったが,尿素で可溶化でき,精製可能できた。【2】ミトコンドリア外膜のβバレル膜蛋白質であるミトコンドリア外膜の膜蛋白質組み込み装置(Tom40およびTob55)およびミトコンドリアポリン(VDAC1,2,3)を大量発現した。封入体は,可溶化でき,精製可能であった。Tom40,Tob55ともに精製をすすめ,現在結晶化に向けて適合する界面活性剤での再生条件を検討している。【3】小胞体膜に蛋白質透過孔を形成するトランスロコンの作用機構の解析を進めた。シグナル配列の膜進入時点で配向を決定する正荷電アミノ酸残基が,25残基離れた場所からもその機能を発揮できることを明らかにした。トランスロコンは予想以上に広い範囲のアミノ酸配列を識別していることが判明した。また,ストレプトアビジンに結合するペプチドタグ(SBP-tag)を使って,ポリペブチド鎖のトランスロコン内での移動を停止・再開できる実験系を確立した。これを用いて,トランスロコンには2本のシグナル配列と2本の膜透過途上の親水性ポリペプチド鎖を収容できることを明らかにした。これらから,トランスロコンはきわめて柔軟に多数のポリペブチド鎖を収容できると結論した。

The intracellular localization of membrane proteins, the separation of membrane proteins, and the understanding of membrane interactions during the formation of membrane structures are described below. [1] Analysis of membrane protein specialization and orientation. The ABC transporter (ABCme ; ABCB10) is a membrane protein with 105 residues at the end of the protein sequence. The structural analysis indicates that the development system of Escherichia coli is set up. It is possible to dissolve and refine the urea in the presence of an encapsulated substance. [2] A large number of β-proteins in the outer membrane were found in the outer membrane protein assembly (Tom40 and Tob55). Enclosed body, soluble, refined. Tom40,Tob55 and Refined, Crystallization to suitable for the regeneration of the interface agent to discuss [3] The analysis of the mechanism of protein permeation pore formation in small cell membrane The alignment of the membrane is determined by the positive charge of the acid residue, and the function of the acid residue is determined by the position of the acid residue. The first step is to identify the above parameters and the second step is to identify the parameters. The system is established when the movement within the lock is stopped and reopened in combination with the SBP-tag. 2. The membrane permeability of the polymer film is higher than that of the polymer film. This is the first time I've ever seen a woman.