膜タンパク質のオルガネラ標的化とトポロジー構築

膜蛋白的细胞器靶向和拓扑结构构建

基本信息

批准号：
17028049
负责人：
阪口雅郎
金额：
$ 5.12万
依托单位：
University of Hyogo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

【1】小胞体トランスロコンは予想外に幅広いアミノ酸配列を識別して膜貫通配列の配向を決定する:シグナル配列が膜に進入する時点で配向を決定するポリペプチド鎖上の正荷電アミノ酸残基が,疎水性配列から25残基離れた場所からも作用できること,正荷電残基はリボソームから外に出て作用していることを明らかにした。トランスロコンは予想以上に広い範囲のアミノ酸配列を識別していると考えられる。【2】小胞体トランスロコンは2本のポリペプチド鎖を許容できる:ストレプトアビジンに結合するベプチドタグ(SBP-tag)を使って,ポリペプチド鎖のトランスロコン内での移動を停止・再開できる実験系を確立した。これを用いて,トランスロコンには2本のシグナル配列と2本の膜透過途上の親水性ポリペブチド鎖を収容できることを明らかにした。収容されたポリベプチド鎖は,ストレプトアビジンから解離後速やかに膜の反対側に移行し,膜内で正常に配向を決定できた。トランスロコンはきわめて柔軟で,多数のポリペブチド鎖を収容できると結論した。【3】シグナル配列がポリベプチド鎖の膜透過を駆動する:力学的アンフォールディング特性が詳細に判明しているタイチン127ドメイン(及びその変異体)をアミノ末端に付加したモデル蛋白質を用いて,N-末端ドメイン膜透過駆動作用を解析した。シグナル配列のトランスロコン内への進入がN-末端の膜透過を引き起こす主要な駆動要因であることが明らかになった。シグナル配列が,ポリベプチド鎖の小胞体への標的化や配向決定にかかわると同時に,駆動の原動力になっていることを示した。

[1]内质网易位易位，意外地确定了广泛的氨基酸序列以确定跨膜序列的方向：我们已经揭示了多肽链上充气电荷的氨基酸残基，这些氨基酸残基在时间上确定信号序列在25个残基上的序列和液压序列的效果，并在液压序列中起作用。人们认为转运量可以鉴定出比预期的更广泛的氨基酸序列。 [2]内质网易转基可耐受两个多肽链：建立了一个实验系统，可以使用veptide TAG（SBP-TAG）（SBP-TAG）在转运中停止并恢复与链霉亲素结合的多肽链的迁移。使用它，据揭示了易位可以在膜的渗透中包含两个信号序列和两个亲水性polypebutide链。与链霉亲和素解离后，含有的聚紫外线链快速迁移到膜的另一侧，并且可以正常确定膜内的方向。得出的结论是，易位非常灵活，可以容纳大量的polypebutide链。 [3]信号序列驱动聚植物链的膜渗透：使用具有TITIN 127结构域（及其突变体）具有详细机械展开特性的模型蛋白，分析了N端域膜渗透驱动动作。已经发现，将信号序列进入转基因是N末端膜渗透的主要驱动力。结果表明，信号序列与靶向多紫外线链靶向内质网，并且还充当驱动器的驱动力。