权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

ARFおよびARLの活性化定量法および細胞内局在決定法の開発

ARF和ARL激活定量方法和细胞内定位方法的开发

基本信息

批准号：
16657059
负责人：
中山和久
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16657059/
关键词：
GGA ARF X線結晶構造解析小胞輸送 ARF-GEF アダプター GATドメイン BIG2

项目摘要

低分子量GTP結合蛋白質ARFは、オルガネラ間の蛋白質輸送を行う輸送小胞の形成を調節する。哺乳動物には6種類のアイソフォーム(ARF1-ARF6)が存在する。細胞質に不活性なGDP結合型で存在するARFは、グアニンヌクレオチド交換因子(ARF-GEF)により活性を有するGTP型になるとオルガネラ膜に結合する。その部位にCOPIやAP-1などのコート蛋白質複合体が結合して輸送小胞の形成が始まる。次に、形成された輸送小胞上のGTP型ARFにGTPase活性化蛋白質(ARF-GAP)が作用してGTPがGDPへと加水分解され、ARFとともにコート蛋白質が小胞膜から遊離する。この裸の輸送小胞が標的オルガネラ膜に融合し、蛋白質輸送が完了する。つまり、細胞内小胞輸送はARF-GEFによるARFのGTP型への変換とARF-GAPによるGDP型への変換により調節されている。最近、ARFと結合して小胞輸送を調節する蛋白質GGAを同定し、GGA分子の中央にあるGATドメインがGTP結合型ARFとの特異的な結合に関与することを示した。そこで本研究では、この相互作用を利用して以下のことを明らかにした。1.GSTと融合させたGATドメインを用いて、細胞内の活性型ARFを定量するプル・ダウンアッセイ系を確立した。2.ARF-GEFの一種であるBIG2を細胞内で発現させた時に、どのARFのアイソフォームを活性化するのかをこのアッセイ系を用いて調べたところ、ARF1とARF3を活性化し、ARF5やARF6を活性化しないことを証明した。

ARF, a low molecular weight GTP binding protein, regulates protein transport and transport vesicle formation during protein production. Mammals have six species of mammals (ARF1-ARF6). Cytoplasmic inactive GDP-binding forms exist, ARF is active, GTP-binding forms exist, ARF-GEF is active, ARF is membrane binding forms exist. COPI and AP-1 protein complexes bind to each other and transport vesicles form. GTP-activated protein (ARF-GAP) plays a role in the formation of GTP-type ARF on transport vesicles. These naked transport vesicles target the fusion of the membrane and complete protein transport. Intracellular transport is regulated by ARF-GEF, GTP and ARF-GAP. Recently, ARF binding and cellular transport regulation of protein GGA identity, GGA molecules in the central region of the GAT, GTP binding ARF specific binding and related to the study This paper studies the interaction between the two. 1. GST-fusion protein was used to quantify the activity of ARF in cells. 2.ARF-GEF is one of the most important components of ARF-GEF. It is demonstrated that BIG2, ARF, AR