权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

低分子量GTP結合蛋白質ARFの活性型の定量法の開発

开发定量低分子量 GTP 结合蛋白 ARF 活性形式的方法

基本信息

批准号：
13878124
负责人：
中山和久
金额：
$ 1.34万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13878124/
关键词：
GGA ARF X線結晶構造解析小胞輸送 ARF-GEF アダプター

项目摘要

低分子量GTP結合蛋白質ARFは,オルガネラ間の蛋白質輸送を行う輸送小胞の形成を調節する。細胞質に不活性なGDP結合型で存在するARFは,グアニンヌクレオチド交換因子(ARF-GEF)により活性を有するGTP型になるとオルガネラ膜に結合する。その部位にCOPIやAP-1などのコート蛋白質複合体が結合して輸送小胞の形成が始まる。次に,形成された輸送小胞上のGTP型ARFにGTPase活性化蛋白質(ARF-GAP)が作用してGTPがGDPへと加水分解され,ARFとともにコート蛋白質が小胞膜から遊離する。この裸の輸送小胞が標的オルガネラ膜に融合し,蛋白質輸送が完了する。つまり,細胞内小胞輸送はARF-GEFによるARFのGTP型への変換とARF-GAPによるGDP型への変換により調節されている。これまでのところ,細胞内でGTP型のARFのみを特異的に検出する方法はない。しかし我々は最近,GTP型ARFとのみ結合して小胞輸送を調節する蛋白質GGAを同定し,GGA分子の中央にあるGGAHドメインがARFとの結合に関与することを示した。そこで本研究では,このGGAHドメインを利用して,細胞でのARFの活性化機構について調べた。1.GGAのGGAHドメインとGTP結合型のARFとの相互作用について,GGAHドメインの種々の変異体を作製し,相互作用の詳細を明らかにした。また,GGAHドメインのX線結晶構造解析を行い,その立体構造を明らかにした。2.ARF-GEFの一種BIG2が細胞内でARFを活性化し,トランスゴルジネットワークでのクラスリン/AP-1コート小胞の形成に関与することを証明した。その際に,GGAのGGAHドメインを用いて,細胞内で実際にARFがBIG2により活性化されることを示した。3.別のARF-GEFであるGBF1が細胞内でARFを活性化し,シスゴルジでのCOPIコート小胞の形成に関与することを証明した。

The low molecular weight GTP binding protein is ARF, and the low molecular weight protein is used to form a small cell membrane. The cell cycle is inactive, the GDP binding type is ARF, and the cross factor (ARF-GEF) binding activity is GTP. The COPIZAP-1 protein conjugate was combined with the donor cell to form a primordial protein. For the second time, the cells were sent with GTP-type ARF GTPase-activated protein (ARF-GAP), GTP, GDP, water-decomposed protein, ARF, protein, membrane, protein, protein. The membrane is fused and the protein is delivered to the cell after the fusion. ARF-GEF, ARFGTP, ARF-GAP, GDP, GTP, GTP, GTP and GTP. This is the best way to find out the method of intracellular GTP-type ARF. Recently, GTP-type ARF fragments were combined with small cells to send the protein GGA to the same level, and the GGA molecule was linked to the central GGAH protein ARF to show the same result. In the course of this study, GGAH information is used to make use of the information, and the activation mechanism of the ARF system is greatly improved. The combination of 1.GGA GGAH and GTP is used to test the ARF interaction model, and the GGAH test is used to verify the interaction between each other. In this paper, the analysis of the X-ray crystal of the GGAH transmission line is made, and the three-dimensional system is made. 2.ARF-GEF uses a kind of BIG2 intracellular ARF to activate it, and the temperature is different from that of the AP-1 cell. GGA, GGA 3. The intracellular ARF is activated by ARF-GEF, the COPI is activated and the cytosol is formed.