マウス初期発生過程におけるリアルタイムの遺伝子発現解析

小鼠早期发育过程中的实时基因表达分析

基本信息

批准号：
16658109
负责人：
青木不学
金额：
$ 1.98万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16658109/
关键词：
mRNA 受精卵初期胚遺伝子発現 BrUTP 免疫沈降

项目摘要

マウス胚は受精後の1細胞期中期より遺伝子発現を開始するが、この時リアルタイムに発現している遺伝子のプロファイルの作成を試みた。すなわち、実際の転写パターンを知るためには、胚中に大量に蓄積された母性mRNAから、新しく合成されたmRNA(新生mRNA)を単離することが必要である。そこで、胚にブロモ標識したUTP(BrUTP)を注入し、抗BrU抗体で沈降させることによってBrUを取り込んだ新生mRNAを単離するという手法を考案した。前年度までの研究において、BrUTPの胚への導入、BrU標識mRNAの免疫沈降などの実験条件に関する検討を行い、実験系がうまく機能していることが確認された。そこで本年度は、マイクロアレイ用に準備した多数の胚から抽出したRNAについて免疫沈降を行い、これによって単離されたmRNAについてマイクロアレイで解析した。その結果、BrUTPを導入していない胚からの免疫沈降物(コントロール)と比較して、BrUTP標識胚からの免疫沈降物(実験群)は、マイクロアレイのシグナル強度で3倍以上高い値を示す遺伝子が54個存在した。逆に、コントロールが実験群よりも3倍以上高い値を示す遺伝子は1個も存在しなかった。このことは、抗BrU抗体による免疫沈降がBrUを取り込んだ新生mRNAを特異的に単離し、さらにそれをマイクロアレイで正確に検出できたことを示すものである。このようにして得られた遺伝子を解析した結果、これまでに1細胞期胚で発現しているという報告のなかったものが50以上含まれていることが明らかとなった。

施肥后，小鼠胚胎开始从单细胞的中期表达基因，目前，我们试图实时创建表达基因的特征。换句话说，为了了解实际的转录模式，有必要将新合成的mRNA（新生mRNA）与胚胎中大量积聚的母体mRNA分离。因此，我们设计了一种技术，其中将Bromo标记的UTP（BRUTP）注入胚胎中，并用抗BRU抗体沉淀，以隔离已服用BRU的新mRNA。在上一年，我们研究了实验条件，例如将BRUTP引入胚胎和BRU标记的mRNA的免疫沉淀，并确认实验系统正常运行良好。因此，今年，我们从为微阵列制备的大量胚胎中提取的RNA免疫沉淀，并使用微阵列分析了通过该方法分离的mRNA。结果，与未用BRUTP引入的胚胎的免疫沉淀物相比，有54个基因在免疫沉淀物中的微阵列信号强度的值高于未引入BRUTP。相反，没有基因存在，其中对照的值比实验组高三倍以上。这表明用抗BRU抗体的免疫沉淀特异性地分离了结合BRU的新BRU mRNA，并且还可以用微阵列准确地检测到它。以这种方式获得的基因的分析表明，尚未据报道其中50多个在一个细胞阶段的胚胎中表达。

项目成果

期刊论文数量（20）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Role of the first mitosis in remodeling of the parental genomes in mouse embryos.

第一次有丝分裂在小鼠胚胎亲本基因组重塑中的作用。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Cell Research 15
影响因子：
0
作者：
Liu;H.
通讯作者：
H.

Isolation of nascent mRNA from mouse preimplantation embryos.

从小鼠植入前胚胎中分离新生 mRNA。

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
Biol.Reprod. 71
影响因子：
0
作者：
Kageyama S;Nagata M;Aoki F
通讯作者：
Aoki F

Degradation of Maternal mRNA in Mouse Embryos : Selective Degradation of Specific mRNA after Fertilization.

小鼠胚胎中母体 mRNA 的降解：受精后特定 mRNA 的选择性降解。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Molecular Reproduction and Development 72
影响因子：
0
作者：
Zohreh;A.
通讯作者：
A.

Localization of Janus Kinase 2 to the nuclei of mature oocytes and early cleavage stage mouse embryos.

Janus 激酶 2 定位于成熟卵母细胞和早期卵裂期小鼠胚胎的细胞核。

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
Biol.Reprod. 71
影响因子：
0
作者：
Ito M;Nakasato M;Suzuki T;Sakai S;Nagata M;Aoki F
通讯作者：
Aoki F

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DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
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通讯作者：
鈴木雅京

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发表时间：
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通讯作者：
笠原良太・湯澤知久・藤井毅・青木不学・鈴木雅京