マウス初期発生過程におけるリアルタイムの遺伝子発現解析

小鼠早期发育过程中的实时基因表达分析

• 批准号: 16658109
• 负责人: 青木 不学
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16658109/
• 关键词: mRNA; 受精卵; 初期胚; 遺伝子発現; BrUTP; 免疫沈降

マウス胚は受精後の1細胞期中期より遺伝子発現を開始するが、この時リアルタイムに発現している遺伝子のプロファイルの作成を試みた。すなわち、実際の転写パターンを知るためには、胚中に大量に蓄積された母性mRNAから、新しく合成されたmRNA(新生mRNA)を単離することが必要である。そこで、胚にブロモ標識したUTP(BrUTP)を注入し、抗BrU抗体で沈降させることによってBrUを取り込んだ新生mRNAを単離するという手法を考案した。前年度までの研究において、BrUTPの胚への導入、BrU標識mRNAの免疫沈降などの実験条件に関する検討を行い、実験系がうまく機能していることが確認された。そこで本年度は、マイクロアレイ用に準備した多数の胚から抽出したRNAについて免疫沈降を行い、これによって単離されたmRNAについてマイクロアレイで解析した。その結果、BrUTPを導入していない胚からの免疫沈降物(コントロール)と比較して、BrUTP標識胚からの免疫沈降物(実験群)は、マイクロアレイのシグナル強度で3倍以上高い値を示す遺伝子が54個存在した。逆に、コントロールが実験群よりも3倍以上高い値を示す遺伝子は1個も存在しなかった。このことは、抗BrU抗体による免疫沈降がBrUを取り込んだ新生mRNAを特異的に単離し、さらにそれをマイクロアレイで正確に検出できたことを示すものである。このようにして得られた遺伝子を解析した結果、これまでに1細胞期胚で発現しているという報告のなかったものが50以上含まれていることが明らかとなった。

During the first cell phase after fertilization, the development of the embryo was studied. It is necessary to accumulate maternal mRNA and new synthetic mRNA in the embryo. The method of injecting BrU antibody into the mouse was investigated. In the past year, the study conducted, the introduction of BrUTP mRNA, the investigation of the conditions related to the immune deposition of BrUTP mRNA, and the confirmation of the function of BrUTP mRNA. This year, the preparation of most of the embryos was carried out in the presence of RNA, and the analysis of mRNA was carried out in the presence of RNA. As a result, BrUTP was introduced into the immune system and compared with BrUTP, BrUTP labeled immune system was more than 3 times stronger than BrUTP labeled immune system. In the reverse direction, the number of cells is more than 3 times higher than that of the number of cells. The anti-BrU antibody was detected by immunoprecipitation, and the expression of BrU mRNA was detected by immunoprecipitation. The results of this analysis are as follows: 1. The results of this analysis are as follows:

项目成果

Isolation of nascent mRNA from mouse preimplantation embryos.

从小鼠植入前胚胎中分离新生 mRNA。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Biol.Reprod. 71
• 作者: Kageyama S;Nagata M;Aoki F
• 通讯作者: Aoki F

Regulation of histone H3 lysine 9 methylation in oocytes and early pre-implantation embryos

• DOI: 10.1242/dev.01116
• 发表时间: 2004-05-01
• 期刊: DEVELOPMENT
• 影响因子: 4.6
• 作者: Liu, HL;Kim, JM;Aoki, F
• 通讯作者: Aoki, F

Regulation of histone acetylation during meiotic maturation in mouse oocytes

• DOI: 10.1002/mrd.20121
• 发表时间: 2004-10-01
• 期刊: MOLECULAR REPRODUCTION AND DEVELOPMENT
• 影响因子: 2.5
• 作者: Akiyama, T;Kim, JM;Aoki, F
• 通讯作者: Aoki, F

Role of the first mitosis in remodeling of the parental genomes in mouse embryos.

第一次有丝分裂在小鼠胚胎亲本基因组重塑中的作用。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Cell Research 15
• 作者: Liu;H.
• 通讯作者: H.

Changes in histone modifications during in vitro maturation of porcine oocytes

• DOI: 10.1002/mrd.20288
• 发表时间: 2005-05-01
• 期刊: MOLECULAR REPRODUCTION AND DEVELOPMENT
• 影响因子: 2.5
• 作者: Endo, T;Naito, K;Tojo, H
• 通讯作者: Tojo, H