雄性単為発生胚の作出による、父母由来ゲノム識別機構の解明

通过创建雄性孤雌胚胎阐明亲本基因组识别机制

• 批准号: 19658103
• 负责人: 青木 不学
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19658103/
• 关键词: 単為発生; 雄性単為発生胚; 着床前初期胚; 卵; ゲノム; 初期胚; 核移植; ヒストンメチル化

本実験の全体の手順は以下のものである。(1)1細胞G2期の胚から雄性前核を取り出し、それをあらかじめ除核しておいた卵殻胞期卵に移植する。(2)IBMXを含む培養液で減数分裂の開始を抑制しながら、数時間培養する。(3)IBMXを除いた培養液に移し、減数分裂を促す。(4)卵が第1極体を放出してMII期に到達したところで、単為発生を促す。その際、サイトカラシンを培養液に加えて、第2極体の放出を抑える。(5)その後の発生を調べる。以上の実験手順の中で、本年度は最も問題が生じることが懸念される(4)のプロセスについての検討を行った。すなわち、第1減数分裂の際、移植された前核が正しく染色体を極体に分配するかどうかという問題である。そこで、第1分裂の後、第2分裂中期に到達した時点で染色体数をカウントし、分配が正しく行われたかどうかの確認を行ったところ、73%の卵において正常な染色体数20本が確認された。さらに、第1減数分裂によって相同染色体の分離が正常に行われているかをY染色体特異的なプローブを用いたFISH法により調べたところ、すべてのサンプルおいてY染色体は卵細胞質と第1極体に別れて存在しており、正常に染色体分配が行われていることが確認された。次に雄性前核移植卵に単為発生を促したところ、38%の卵で前核の形成が認められ、そのすべてが2細胞期まで発生した。上のように、計画した雄性単為発生胚作出のための実験系は有効であることが確認されたが、前核形成率が38%とかなり低く、さらに実験系の改良が必要であることが示唆された。

The actual operation of all of us is below. (1)1 The embryo at G2 stage is removed from the male pronucleus and transferred to the egg at the shell stage. (2)IBMX culture medium inhibited meiosis initiation and maintained for several days. (3)IBMX removal medium transfer, meiosis promotion. (4)The first polar body is released and the second polar body is released. The second polar body is released from the culture medium. (5)After the birth of the company, it will be adjusted. The above is the most important issue of the year.(4) The most important issue is the discussion of the year. During meiosis 1, the nucleus before transplantation is divided into two parts: chromosome allocation and chromosome division. The number of chromosomes was confirmed at the time point of arrival of the first division and the second division, and the number of normal chromosomes was confirmed at the time point of arrival of the second division. The first meiotic chromosome segregation was confirmed by FISH. The second meiotic chromosome segregation was confirmed by FISH. The second male pronucleus transfer eggs were developed at the 2-cell stage, and 38% of the eggs were developed at the 2-cell stage. Above all, it is confirmed that the actual system designed by the male alone for the development of embryos is effective, the pronucleus formation rate is only 38%, which is low, and it is encouraging that improvements to the actual system are necessary.

项目成果

Deficiency in the response to DNA double-strand breaks in mouse early preimplantation embryos.

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2007.04.162
• 发表时间: 2007-06
• 期刊: Biochemical and biophysical research communications
• 影响因子: 3.1
• 作者: M. Yukawa;S. Oda;H. Mitani;M. Nagata;F. Aoki

減数分裂におけるヒストン修飾の機能.

组蛋白修饰在减数分裂中的功能。

• 发表时间: 2007
• 作者: Kageyama;S;Endo. T.;青木不学
• 通讯作者: 青木不学

受精前後における遺伝子発現リプログラミング機構の解明

阐明受精前后基因表达重编程机制

• 发表时间: 2008
• 作者: Yukawa;M;Kageyama;青木不学
• 通讯作者: 青木不学

Roles of the first and second round of DNA replication in the regulation of zygotic gene activation in mice.

• DOI: 10.1262/jrd.20053
• 发表时间: 2008-06
• 期刊: The Journal of reproduction and development
• 作者: Hiroki Sonehara;M. Nagata;F. Aoki

Contribution of the oocyte nucleus and cytoplasm to the determination of meiotic and developmental competece in mice.

卵母细胞核和细胞质对小鼠减数分裂和发育能力测定的贡献。

• 发表时间: 2008
• 期刊: Hum. Reprod. 23
• 作者: Roh SG;Song SH;Fukui K;Satoh T;Katoh K;Sasaki S.;福井 一晃 外6名;Sonehara H;Inoue A
• 通讯作者: Inoue A