受精卵における外来ミトコンドリア絶滅の原因究明に関する研究

受精卵外源线粒体灭绝原因研究

• 批准号: 12876059
• 负责人: 青木 不学
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12876059/
• 关键词: 受精卵; 初期胚; マウス; ミトコンドリア; 受精

受精卵におけるミトコンドリアタンパク質の消長を調べる目的で、まずそれをコードする遺伝子の発現について調べた。ミトコンドリアを構成するタンパク質の大部分は核にコードされた遺伝子から発現しており、細胞質で合成されたタンパク質がミトコンドリア内にインポートされることによりミトコンドリアの構成タンパク質となる。そこで、その消長を調べるために、まず、インポートに重要な役割を演じていると考えられているTim23の発現を調べることにした。マウスにおいては、Tim23は未だクローニングされていなかったため、まずそのクローニングを試みた。乳腺細胞は泌乳期に著しくミトコンドリアの数が増えるため、ここから得たmRNAを材料にして、ヒト、酵母などのTim23の塩基配列を参考にPCRプライマーを作成し、Tim23 cDNA断片を得、さらに3'および5'-RACEで全長のcDNAを得た。このcDNAを用いて、乳腺細胞についてin siteハイブリダイザイションを行った結果、増殖期に比べて、ミトコンドリアの数が増える泌乳期で著しくTim23の発現量が増えていることが確認できた。また、RT-PCRによっても泌乳期での著しい発現増加が確認できた。さらに増殖期の乳腺をホルモン処理により泌乳状態に変えることにより、Tim23の発現増加が誘導できた。これらの結果は、Tim23遺伝子の発現とミトコンドリア数の増加が密接に関連しており、この発現量の変化がミトコンドリアの消長の良い指標になることを示している。そこで、次に初期胚におけるTim23の発現をRT-PCRによって調べたところ、受精後にTim23遺伝子の発現が確認できた。

Fertilized egg に お け る ミ ト コ ン ド リ ア タ ン パ ク qualitative の changeing を adjustable べ で, ま る purpose ず そ れ を コ ー ド す る heritage 伝 son の 発 now に つ い て adjustable べ た. ミ ト コ ン ド リ ア を constitute す る タ ン パ ク mass の most は nuclear に コ ー ド さ れ た posthumous son 伝 か ら 発 now し て お り, cytoplasm で synthetic さ れ た タ ン パ ク qualitative が ミ ト コ ン ド リ ア within に イ ン ポ ー ト さ れ る こ と に よ り ミ ト コ ン ド リ ア の constitute タ ン パ ク qualitative と な る. そ こ で, そ の changeing を adjustable べ る た め に, ま ず, イ ン ポ ー ト に cut を play important な service じ て い る と exam え ら れ て い る Tim23 の 発 now を adjustable べ る こ と に し た. マ ウ ス に お い て は, Tim23 は not だ ク ロ ー ニ ン グ さ れ て い な か っ た た め, ま ず そ の ク ロ ー ニ ン グ を try み た. The udder cell は lactation に the し く ミ ト コ ン ド リ ア の number が raised え る た め, こ こ か ら must た mRNA を material に し て, ヒ ト, yeast な ど の Tim23 の salt base with column を reference に PCR プ ラ イ マ ー を し, consummate Tim23 cDNA fragments を obtained さらに3'および5'-RACEで full-length cDNAを obtained た. こ の cDNA を with い て, breast cells に つ い て in site ハ イ ブ リ ダ イ ザ イ シ ョ ン を line っ た results, raised colonization period に than べ て, ミ ト コ ン ド リ ア の number が raised え る lactation で the し く Tim23 の 発 now quantity が raised え て い る こ と が confirm で き た. Youdaoplaceholder0, RT-PCRによって また lactation で shows an increase in the occurrence of <s:1> が confirmation で た た た. さ ら に raised colonization period の breast を ホ ル モ ン 処 Richard に よ り lactation state に - え る こ と に よ り, Tim23 の 発 now rights が induced で き た. こ れ ら の results は, Tim23 but 伝 の 発 now と ミ ト コ ン ド リ ア Numbers is の raised が contact に masato even し て お り, こ の 発 amount is の variations change が ミ ト コ ン ド リ ア の changeing の good い index に な る こ と を shown し て い る. そ こ に で, time in the early embryo に お け る Tim23 の 発 now を rt-pcr に よ っ て adjustable べ た と こ ろ, after fertilization に Tim23 heritage 伝 son の 発 が now confirmed で き た.

项目成果

Fuchimoto, D.: "Posttranscriptional regulation of cyclin Al and cyclin A2 during mouse oocyte meiotic maturation and preimplantation development"Biol. Reprod.. 65. 986-993 (2001)

Fuchimoto, D.：“小鼠卵母细胞减数分裂成熟和植入前发育过程中细胞周期蛋白 A1 和细胞周期蛋白 A2 的转录后调节”Biol。

Ito,M,Sakai,S,Nagata.M,Aoki,F: "Effect of histone deacetylase inhibitors on the early preimplantation development in mouse embryor."J.Mamm.Ora Res.. 17. 90-95 (2000)

Ito,M,Sakai,S,Nagata.M,Aoki,F：“组蛋白脱乙酰酶抑制剂对小鼠胚胎早期植入前发育的影响。”J.Mamm.Ora Res.. 17. 90-95 (2000)

Kuraishi, .T: "The casein mRNA decay changes in parallel with the poly(A)tail length in the mouse mammary gland"Mol. Cell. Endoc.. (in press).

Kuraishi, .T：“小鼠乳腺中酪蛋白 mRNA 的衰变与聚 (A) 尾长度平行变化”Mol。

Sun, Y: "Hormonal Regulation of mitochondrial Tim23 gene expression in the mouse mammary gland"Mol. Cell. Endoc.. 172. 177-184 (2001)

Sun，Y：“小鼠乳腺中线粒体 Tim23 基因表达的激素调节”Mol。

Cho, T.: "Involvement of chromatin structure in the regulation of mouse zygotic gene activation"Anim. Sci. J.. (in press).

Cho, T.：“染色质结构参与小鼠合子基因激活的调节”Anim。