多機能ウイルス遺伝子EIAを用いた転写因子制御の膵癌転移抑制療法

利用多功能病毒基因EIA进行转录因子调节的胰腺癌转移抑制治疗

基本信息

批准号：
16659349
负责人：
砂村眞琴
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659349/
关键词：
転写因子 E1A HIF p300 アデノウイルス VEGF 血管新生

项目摘要

【目的】癌細胞の悪性形質に関わる複数の遺伝子発現を調節するには、遺伝子発現を支配する転写因子を制御することにより可能になる。我々が着目したのは、アデノウイルスが増殖に際して発現するE1A遺伝子である。本研究で、VEGF等の血管新生因子やMMPなどの浸潤関連遺伝子の発現に重要な転写因子Hypoxia Inducible Factor(HIF), Etsなどに共通して必須な因子p300にE1Aが結合することを利用し、腫瘍血管新生や浸潤能を制御することである。さらにウイルスのファイバーノブをRGD構造に改変しアデノウイルスベクターの導入効率を改善させる。【方法】膵癌細胞4種に対し様々なE1Aをもつアデノウイルスベクター5種を感染させ、1)ウイルス感染、低酸素負荷時のVEGF濃度の測定(ELISA法),VEGF mRnAの発現(RT-PCR法)、2)E1A, p300による免疫沈降実験、3)皮下腫瘍モデルにおける腫瘍血管新生の検討を行った。また、4)RGD改変ファイバーを有するアデノウイルスの感染効率を野生型ウイルスと比較した。【結果】1)低酸素刺激によりp300結合部位をもたないE1A発現細胞ではVEGF蛋白,mRNAの発現が高まり、野生E1A発現細胞では未刺激時の時同等に抑制された。2)免疫沈降実験でp300結合部位をもたないE1A発現細胞ではp300との結合が低下し、E1A発現細胞での低酸素時VEGF低下にはE1A, p300の結合の関与が示唆された。3)in vivoでもp300結合部位をもたないウイルス感染細胞では野生E1A群に比べ血管新生が強く認められた。4)RGD改変ファイバーを有するアデノウイルスでは有意に感染効率が改善した。【考察】野生E1Aを発現する制限増殖型アデノウイルスにより腫瘍血管新生を抑制できる可能性が示唆された。また、改変RGDファイバーを有する制限増殖型アデノウイルスは効果的な治療手段となると考えられた。

目的：通过控制控制基因表达的转录因子，可以调节与癌细胞的恶性特征有关的多种基因表达。我们关注的是E1A基因，该基因在腺病毒增殖过程中表达。在这项研究中，我们使用E1A与p300的结合，这是一种通常用于表达诸如VEGF和与侵袭相关基因（例如MMP，p300）之类的血管生成因子的重要因素，这是用于表达与入侵相关基因的表达，例如低氧诱导因子（HIF），ETS等，to Tumor Angeoge，通常用于表达与入侵相关的基因。此外，将病毒纤维旋钮修改为RGD结构，以提高引入腺病毒载体的效率。 [方法]四种类型的胰腺癌细胞用五个具有不同E1a的腺病毒载体感染，1）在病毒感染和缺氧负荷（ELISA方法）期间的VEGF浓度测量（ELISA方法），VEGF mRNA的表达，VEGF mRNA（RT-PCR方法）的表达调查。 4）还将带有RGD修饰纤维的腺病毒的感染效率与野生型病毒进行了比较。 [结果] 1）缺氧刺激增加了没有p300结合位点的表达E1A的细胞中VEGF蛋白和mRNA的表达，并且在野生E1a表达细胞中未刺激时也同样受到抑制。 2）在免疫沉淀实验中，在没有P300结合位点的E1A表达细胞中降低了与P300的结合，这表明E1A和P300的结合参与了E1A表达细胞中低氧期间VEGF的结合。 3）血管生成在体内的体内比体内的E1a组更为明显。 4）用RGD修饰纤维用腺病毒可显着提高感染效率。 [讨论]有人提出，表达野生E1a的限制性增殖腺病毒可能抑制肿瘤血管生成。此外，具有修饰的RGD纤维的限制性腺病毒被认为是有效的治疗剂。