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特定中枢神経ネットワークのMRIによる非侵害的可視化技術の開発

利用特定中枢神经网络的 MRI 开发非侵入式可视化技术

基本信息

批准号：
17650103
负责人：
井上誠
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1)培養神経細胞における神経ネットワーク可視化評価系の確立。EGFP遺伝子発現ベクターとDsRed2遺伝子発現ベクターを海馬初代培養細胞あるいは分化したPC12培養細胞にリポフェクタミンを用い同時に遺伝子導入したところ、両蛍光シグナルが観察されない細胞が観察された。そこで、2つのCMVプロモーターを持つ発現ベクターにEGFPとDsRed2遺伝子をクローニングし導入したところ、すべての細胞で両シグナルが観察された。次に、この発現ベクターにシナプス経輸送する性質を持つWGA蛋白質とEGFPの融合蛋白質遺伝子とDsRed2遺伝子をクローニングし導入したところ、DsRed2とEGFPシグナルを示す細胞群と、ベジクル様のEGFPシグナルのみを示す細胞群が観察された。従って、WGA蛋白質の性質と同様に、WGA-EGFP融合蛋白質は神経ネットワークを介し、他の細胞にシナプス経輸送されることが判明した。このことはまた、このWGAとEGFPを融合する際に構築した配列はWGA機能に影響を及ぼさない可能性が示唆された。2)WGA-ミオグロビン遺伝子の構築と機能解析。PCR法を用いマウス脳cDNAからミオグロビン遺伝子を増幅し、WGAとEGFP融合蛋白質遺伝子と同じ融合配列になる様にこれをWGA発現ベクターにクローニングした。次に、このWGA-ミオグロビン融合蛋白質遺伝子発現ベクターを分化したPC12培養細胞に遺伝子導入し、WGA抗体を用い染色したところ、ベジクル様シグナルが観察された。従って、ミオグロビン遺伝子との融合においても、WGA蛋白質の性質を変えないことが判明した。従って、この構築したWGA-ミオグロビン遺伝子を特異的領域に遺伝子導入し、ミオグロビンによる鉄吸着に伴う磁気共鳴シグナル低下を利用して、その領域からの神経ネットワークをMRIにより非侵襲的に可視化できる可能性が示唆された。

1)Establishment of a visual evaluation system for neurogenesis in cultured neurons. EGFP gene expression in DsRed2 gene expression in hippocampus primary culture cells, differentiation in PC12 culture cells, and gene expression in PC12 cells. 2. The CMV virus is detected by the EGFP and DsRed2 gene. In addition, the development of EGFP fusion protein gene and DsRed2 fusion protein gene was studied by cell population and EGFP fusion protein gene. In addition, the properties of WGA protein and WGA-EGFP fusion protein have been identified. This is the first time that WGA has been constructed. 2)WGA-100 PCR method was used to detect cDNA fragments, WGA and EGFP fusion protein fragments and fusion sequences. In addition, WGA-1 fusion protein gene expression was detected in PC12 cultured cells by gene introduction and WGA antibody staining. The nature of WGA protein was determined by the fusion of WGA protein and WGA protein. In addition, the construction of WGA-10 allows for the introduction of gene into specific domains, the use of iron adsorption associated with magnetic resonance imaging, and the possibility of non-invasive visualization of brain tissue in all domains.