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PLC活性のリアルタイム測定法を用いた細胞内シグナルのクロストニクの解析

使用实时测量 PLC 活动来分析凝集细胞内信号

基本信息

批准号：
17650112
负责人：
少作隆子
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17650112/
关键词：
ボスホリパーゼC カルシウムイオン細胞内シグナル NMDA型グルタミン酸受容体内因性カンナビノイドクロストーク海馬ニューロンホスホリパーゼC MNDA型グルタミン酸受容体 TRPC6チャネル代謝型グルタミン酸受容体ムスカリン受容体

项目摘要

1.細胞内シグナル伝達系間のクロストークを調べるために,1個の細胞内のシグナル伝達の大きさをリアルタイムでモニターする方法の開発を試みた。初年度は,PLCの代謝産物であるジアシルグリセロールにより活性化されるチャネル(TRPC6チャネル,を培養海馬ニューロンに強制発現させ,PLC活性をモニターする方法を用いて実験を行った。その過程で,内因性カンナビノイド放出量がGq共役型受容体-PLCbetaシグナル伝達系の活性を反映することが明らかとなった。そこで次年度は1個の細胞から放出される内因性カンナビノイド量を電気生理学的方法によりモニターするという方法を用いて,Gq共役型受容体-PLCbetaシグナル伝達系とNMDA型グルタミン酸受容体-Ca2+シグナル伝達系の聞のクロストークについて調べた。本年度は,Gq共役型受容体-PLCbetaシグナル伝達系をモニターする別の系の開発を試みた。2.培養海馬ニューロンにmAChRアゴニストを投与すると、多くの細胞では一過性の脱分極が発生した。この効果は、PLC阻害剤により抑制されることから、Gq共役型受容体-PLCbetaシグナル伝達系を介していると考えられた。またmAChRアゴニスト投与による脱分極の大きさが細胞内Ca2+濃度に依存すうことが判明した。よって、Gq共役型受容体-PLCbetaシグナル伝達系とMDA型グルタミン酸受容体-Ca2+シグナル伝達系の間のクロストークを、この脱分極信号を指標にして調べることも可能であると考えられた。PLCbetaの基質であるPIP2の濃度変化に鋭敏に反応するチャネルを強制発現することにより、より感度の高いモニター系を開発することができると期待される。

1. The development of a new method for the regulation of intracellular protein expression in a cellular system was studied. In the early years, the method of PLC activity regulation was carried out by using the method of PLC metabolite regulation (TRPC6), stress regulation in cultured hippocampus and PLC activity regulation. In the process, the intrinsic emission is reflected in the activity of the receptor-PLCbeta. In the next year, one cell was released from the cell. The method of electrophysiology was used. Gq co-active receptor-PLCbeta receptor-NMDA-type receptor-Ca 2+ receptor-NMDA-type Ca2+ receptor-Ca This year, the development of Gq shared receptors-PLCbeta-is being tested. 2. In cultured hippocampus, the mAChR cells were injected into the medium, and many cells were transiently depolarized. The result is that the PLC-beta receptor system can be used to inhibit the proliferation of PLC-beta receptors. The concentration of Ca2 + in cells depends on the concentration of Ca2 + in cells. A common service receptor-PLCbeta type receptor-MDA type receptor-Ca2 + type receptor-Ca Changes in the concentration of PIP2 in PLCbeta matrix cause acute reaction, stress, and high sensitivity to the development of the system.