Joinasome:DNA二重鎖切断修復に関わる超高次複合体の解明

Joinasome：阐明参与 DNA 双链断裂修复的超高阶复合物

• 批准号: 17651025
• 负责人: 松本 義久
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17651025/
• 关键词: DNA二重鎖切断; DNA修復; 組換え; XRCC4; DNA ligase IV; DNA-PK

"Joinasome"とは、真核細胞の主要なDNA二重鎖切断(DSB)修復機構の一つ、非相同末端再結合(NHEJ)反応経路を触媒する酵素群の総体の意である。NHEJにおいては、DSBを認識するDNA-PK、最終的にDNA鎖同士を結合するXRCC4-DNA ligase IVが重要な役割を担うと考えられているが、本研究代表者は、最近数年、DNA-PKによるXRCC4-DNA ligase IV機能調節機構の研究を行っている。その過程で、昨年度、放射線照射後にXRCC4分子がクロマチンDNAに結合し、界面活性化剤抽出に抵抗性となることを見出した。本研究はこのDNA結合状態のXRCC4を含む複合体を単離し、解析することにより、DSB修復機構の全体像解明の一助とすることを目的として行った。複合体単離は、マウスM10細胞(内在性のXRCC4を欠損)にFLAGタグ付きのXRCC4を導入した安定発現株M10-X4を出発材料とし、(1)これに放射線を照射し、一定時間後に回収、(2)界面活性剤を含むバッファで抽出後、遠心、(3)沈澱をヌクレアーゼで部分消化、(4)FLAG抗体カラムによるアフィニティークロマトグラフィー、により行った。まず、小スケール(細胞10^7個程度)の実験により、DNA-PKの必要性、阻害剤の効果、リン酸化部位欠損XRCC4の挙動などを検討した。また、条件至適化の上、スケールアップし(細胞数10^9〜10^<10>個)、成分同定を進めている。なお、この研究遂行にあたり、インド、Bhabha Atomic Research CenterのSushma M.Bhosle氏の協力を頂いた。

The main components of Joinasome, eukaryotic cell, DNA double cut-off (DSB) repair machine, non-identical end recombination (NHEJ), reverse pathway, enzyme group, enzyme group. In recent years, the representative of this study, the representative of this study, and in recent years, DNA-PK has been engaged in the research on the performance of NHEJ, DSB, DNA-PK, and the most popular DNA students in conjunction with the important service cutting of XRCC4-DNA ligase IV. After last year, radiation exposure, XRCC4 molecular weight loss and DNA binding, interface activation was performed to extract resistance. In this study, the combination of DNA and state XRCC4 includes the isolation of the complex, the analysis of the system, and the whole image of the DSB repair machine to help the purpose of the system. The complex was isolated, cloned into the M10 cell (endogenous XRCC4 was deficient), and FLAG was responsible for the introduction of diazepam into the current M10-X4. (1) radiation exposure, after a certain period of time, (2) the interfacial activity was extracted, isolated, digested, digested, and partially digested. (4) FLAG antibodies were detected by Elisa. The concentration of DNA-PK, the necessity, the hindrance and the acidification of XRCC4 in the acidified parts are not enough. Make sure that the number of cells is 10 ^ 9 ~ 10 ^ & lt;10>, and the composition is the same. In this study, we carried out the research on the use of Bhabha Atomic Research Center, Sushma M.Bhosle, and the coordination of the two groups.

项目成果

Prognostic significance of Ku70 protein expression in patients with advanced colorectal cancer.

• 发表时间: 2005-07
• 期刊: Hepato-gastroenterology
• 作者: Y. Komuro;Toshiaki Watanabe;Y. Hosoi;Y. Matsumoto;K. Nakagawa;N. Suzuki;H. Nagawa

The association of DNA-dependent protein kinase activity with chromosomal instability and risk of cancer

• DOI: 10.1093/carcin/bgi175
• 发表时间: 2006-01-01
• 期刊: CARCINOGENESIS
• 影响因子: 4.7
• 作者: Someya, M;Sakata, K;Hareyama, M
• 通讯作者: Hareyama, M

DNA二重鎖切断センサー:DNA依存性プロテインキナーゼ(DNA-PK)機能研究の現状と課題

DNA双链断裂传感器：DNA依赖性蛋白激酶（DNA-PK）功能研究的现状与挑战

• 发表时间: 2005
• 期刊: 放射線生物研究 40(2)
• 作者: Someya;M.;Sakata;K.;Matsumoto;Y.;他7名;松本 義久
• 通讯作者: 松本 義久