Joinasome:DNA二重鎖切断修復に関わる超高次複合体の解明

Joinasome：阐明参与 DNA 双链断裂修复的超高阶复合物

基本信息

批准号：
17651025
负责人：
松本義久
金额：
$ 2.24万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17651025/
关键词：
DNA二重鎖切断 DNA修復組換え XRCC4 DNA ligase IV DNA-PK

项目摘要

"Joinasome"とは、真核細胞の主要なDNA二重鎖切断(DSB)修復機構の一つ、非相同末端再結合(NHEJ)反応経路を触媒する酵素群の総体の意である。NHEJにおいては、DSBを認識するDNA-PK、最終的にDNA鎖同士を結合するXRCC4-DNA ligase IVが重要な役割を担うと考えられているが、本研究代表者は、最近数年、DNA-PKによるXRCC4-DNA ligase IV機能調節機構の研究を行っている。その過程で、昨年度、放射線照射後にXRCC4分子がクロマチンDNAに結合し、界面活性化剤抽出に抵抗性となることを見出した。本研究はこのDNA結合状態のXRCC4を含む複合体を単離し、解析することにより、DSB修復機構の全体像解明の一助とすることを目的として行った。複合体単離は、マウスM10細胞(内在性のXRCC4を欠損)にFLAGタグ付きのXRCC4を導入した安定発現株M10-X4を出発材料とし、(1)これに放射線を照射し、一定時間後に回収、(2)界面活性剤を含むバッファで抽出後、遠心、(3)沈澱をヌクレアーゼで部分消化、(4)FLAG抗体カラムによるアフィニティークロマトグラフィー、により行った。まず、小スケール(細胞10^7個程度)の実験により、DNA-PKの必要性、阻害剤の効果、リン酸化部位欠損XRCC4の挙動などを検討した。また、条件至適化の上、スケールアップし(細胞数10^9〜10^<10>個)、成分同定を進めている。なお、この研究遂行にあたり、インド、Bhabha Atomic Research CenterのSushma M.Bhosle氏の協力を頂いた。

“结合体”是指催化异源末端重组（NHEJ）反应途径的全部酶，这是真核细胞中主要的DNA双链破裂（DSB）修复机制之一。在NHEJ中，识别DSB的DNA-PK和最终将DNA链结合在一起的XRCC4-DNA连接酶IV被认为起着重要作用。近年来，首席研究者一直在研究DNA-PK的XRCC4-DNA连接酶IV函数调节机制。在此过程中，去年，发现XRCC4分子在辐射后与染色质DNA结合，从而使它们具有抗表面活性剂的萃取。进行这项研究的目的是在DNA结合状态下隔离和分析包含XRCC4的复合物，从而有助于阐明DSB修复机制的整体情况。从稳定的表达菌株M10-X4中分离出该复合物，其中将小鼠M10细胞（内源性XRCC4缺乏）引入到标记标记的XRCC4中，（1）（1）混合物用辐射辐射，在一定时间段内恢复，在一定时间段内（2）提取含有的缓冲液（4），（4）（3）（3）（3）（3）（3）（3）（3）（3）（3）（3）（3）标志抗体柱上的色谱。首先，我们通过小型实验（大约10^7个细胞）研究了DNA-PK的必要性，抑制剂的效果以及磷酸化位点缺陷XRCC4的行为。此外，已经开发出了优化条件，并将组件缩放（细胞计数为10^9至10^<10>）以识别组件。此外，我们还收到了印度Bhabha Atomic Research Center的Sushma M.Bhosle的合作，以进行这项研究。

项目成果

期刊论文数量（3）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Prognostic significance of Ku70 protein expression in patients with advanced colorectal cancer.

DOI：
发表时间：
2005-07
期刊：
Hepato-gastroenterology
影响因子：
0
作者：
Y. Komuro;Toshiaki Watanabe;Y. Hosoi;Y. Matsumoto;K. Nakagawa;N. Suzuki;H. Nagawa
通讯作者：
Y. Komuro;Toshiaki Watanabe;Y. Hosoi;Y. Matsumoto;K. Nakagawa;N. Suzuki;H. Nagawa

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