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DNA二重鎖切断の認識・修復の分子機構に基づく放射線感受性予測・制御の新戦略体系

基于DNA双链断裂识别与修复分子机制的放射敏感性预测与控制新策略体系

基本信息

批准号：
17689036
负责人：
松本義久
金额：
$ 18.72万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology (2006-2007)The University of Tokyo (2005)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

1.DNA-PKの真の基質とリン酸化の意義を明らかにするため、これまで検討を続けてきたXRCC4と2006年に新規に発見された分子XLF/Cernunnosについて重点的な検討を行った。XRCC4については、昨年度までの研究で明らかになった部位3カ所の他に、新たに1カ所が同定された。この部位については、文献情報等から他の修復酵素との相互作用に関わる可能性が考えられる。XLFについては2カ所のリン酸化部位が同定された。これら3カ所についてリン酸化状態特異的抗体を作製した。2.これまでに、XRCC4が放射線照射後にクロマチンに結合している状態を捉まえる方法を確立した。本年度は、siRNA、阻害剤などを用いてXRCC4の損傷クロマチン結合機構を解析した結果、DNA-PK及び類縁酵素のATMは結合に必要ではないことが分かった。このXRCCクロマチン結合カイネティクスは極めて早く、2Gy照射の場合、直後にピークとなり、30分後にはほとんどもとの状態に戻る。更に、定量的解析の結果、クロマチン結合XRCC4はDNA二重鎖あたり1個から数個と見積もられた。従って、この方法はin vivoでのDNA二重鎖切断修復反応を反映する迅速で微量の反応を捉えるのに優れていると考えられる。また、この方法を利用して、クロマチンごとXRCC4を精製した。この成分を明らかにすることにより、NHEJによるDNA二重鎖切断修復の全体像理解の進展が期待される。3.これまでの研究で、ヒト末梢血リンパ球のDNA-PK活性には大きな個人差があり、がん患者では健常人に比べて低い傾向が観察されていた。その機構について、DNA-PKcs、Ku86、Ku70に共通する転写調節機構の存在が示唆されていた。本年度、バイオインフォマティクスを加えた検討により、細胞周期節に関わるE2F がこの制御に関わっていることが示唆されていた。

1. The significance of DNA-PK matrix acidification is clear, and the new regulation of XLF/Cerunnos was developed in 2006. XRCC4, last year's research will be completed in 3 locations and 1 location in the new location. The site of the disease, literature information, etc., other repair enzyme interaction related to the possibility of examination XLF is the same as 2 parts of the acid. The antibody specific to the acidification state is controlled by the antibody. 2. XRCC4: Establish the method for detecting the state after radiation irradiation. This year, siRNA, inhibitor and inhibitor were used to analyze the mechanism of damage and binding of XRCC4, and DNA-PK and ATM-like enzymes were used to analyze the mechanism. The XRCC can be used in combination with the following conditions: early morning, 2Gy irradiation, immediate post-irradiation, 30 minutes post-irradiation. More, quantitative analysis of the results, CRCC 4 DNA double lock, CRCC 4 DNA double lock, CRCC 4 DNA double lock. This method can be used to detect DNA double-lock repair reactions in vivo. The method is used to refine XRCC4. The progress of DNA double-lock repair is expected. 3. The DNA-PK activity in peripheral blood was observed to be significantly lower in patients than in healthy individuals. The existence of a common mechanism, DNA-PKcs, Ku86, Ku70, is indicated. This year, the number of cells in the cell cycle is increasing.