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プロテインチップに用いる新しい蛍光検出反応の開発

新型蛋白质芯片荧光检测反应的开发

基本信息

批准号：
17655035
负责人：
甲斐雅亮
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究代表者らは、最近、カテコールとホウ酸塩がペプチドのN末端アミノ酸のアミノ基と隣接ペプチド結合を認識して蛍光を発する現象を見出した。昨年度の研究では、この蛍光現象を化学的に解析し、ペプチドホルモンに対する特異的な高感度蛍光検出反応を開発した。この蛍光反応は、ペプチドに対して抗原抗体反応に匹敵する特異性を有し、複雑な試料から微量ペプチドホルモンを光学的に検出できるものであり、高価なモノクローナル抗体や特種な反応装置を必要としないものである。そこで、本年度の研究では、この蛍光反応を、ペプチドホルモンのプロテインチップ系の高感度検査法としての適応化を試みた。まず、タンパク質の安価な吸着膜であるPVDF膜に吸着させたインスリンペプチドの蛍光反応の最適条件の検討を行った。その結果、膜に吸着させたタンパク質、インスリン抗体及びウシ血清アルブミンを有機溶媒(メタノールまたはメチルセロソルブ)の変性作用により、タンパク質に比べ変性の影響の少ないインスリンを選択的に蛍光検出できることが分かった。さらに、膜をシャーレー中に浸し、カテコール、NalO_4、及びホウ酸塩(pH8)を加えて、インスリンを定量的に蛍光体に変換する諸条件を検討した結果、数ピコモルレベルのインスリンを定量できた。この感度は血液中のインスリンを測定するには不十分であるが、開発した方法は、検体抽出液を濃縮することによって、各種の生理活性ペプチドを、チップアレイ上で、一斉に検出できる新たな手法を提供できるものである。

The authors of this study have recently discovered the phenomenon of light emission from N-terminal amino acids and adjacent amino acids. This year's research is aimed at the chemical analysis of this phenomenon and the development of a specific high-sensitivity fluorescence reaction. The optical reflection device has the specificity to match the antigen and antibody, and the optical detection device has the specificity to match the antigen and antibody, and the high sensitivity to match the antibody and special reaction device. This year's study is aimed at investigating the sensitivity of light reflection and adaptation of light sources. The optimum conditions for the absorption of light from PVDF films were discussed. The results show that the membrane adsorption of different substances, antibodies and serum, and organic solvents (such as organic solvents) have different effects on the membrane adsorption of different substances, and the effects of different substances on the membrane adsorption of different substances are different. In addition, the film was immersed in water, NaO_4, and H_2SO_4 (pH8). The results showed that the concentration of H_2SO_4 and H_2SO_4 in water was higher than that in H_2SO_4. The sensitivity of the blood sample is determined by a new method.