权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

マイクロチップ上の遺伝子及びタンパク質の検出に用いる超高感度発光プローブの創製

创建用于检测微芯片上的基因和蛋白质的超灵敏发光探针

基本信息

批准号：
06F06229
负责人：
甲斐雅亮
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、細胞内で発現している極微量の核酸遺伝子やタンパク質の多型を網羅的に解析できる、新しい超高感度分子プローブの開発を目的としている。本年度は、膜上のアビジン類タンパク質を特異的に検出できるプローブの創製を目指して、新規発光性核酸プローブの合成研究を計画した。具体的には、大腸菌2本鎖DNAを基本骨格に持ち、分子内に多数のイソルミノールおよびビオチンを結合させた、新規化学発光性DNAプローブを合成した。その結果、市販のイソルミノール化試薬およびビオチン化試薬を用いて非常に簡便な操作で合成でき、かつエタノール沈殿のみで精製できることが分かった。このDNAプローブの化学発光強度を調べたところ、非常に強い発光を示すことを見出した。また、プロテインチップへの応用を考慮し、PVDF膜に吸着させたアビジン類タンパク質に対するDNAプローブの結合能を評価したところ、DNAプローブとアビジン類タンパク質の特異的結合、およびDNAプローブがアビジンを介して連鎖複合体を形成することが確認できた。本法によるビオチンおよびイソルミノール標識化を核酸アプタマーに応用できれば、検体タンパク質に結合したアプタマーを起点として、検体タンパク質に結合していないアプタマーがビオチンを介して連鎖的に複合体を形成するため、検出感度を大幅に上昇させることが可能となる。すなわち、本研究の結果より本法は、網羅的タンパク質解析のための超高感度核酸アプタマー検出に応用可能であることが示唆された。

The aim of this study is to analyze the molecular diversity of nucleic acid sequences detected in very small amounts in cells and to develop novel ultra-sensitive molecules. This year, we plan to develop new methods for the synthesis of photoactive nucleic acids. Specific DNA, E. coli 2, DNA, DNA As a result, it is very easy to operate and refine the chemical test products. The intensity of chemical emission of DNA is modulated, and the intensity of chemical emission is very high. In consideration of the use of PVDF membrane, the binding energy of DNA molecules adsorbed on PVDF membrane was evaluated, and the specific binding of DNA molecules to PVDF membrane was confirmed. The method is characterized in that: the nucleic acid is labeled with a high sensitivity; and the nucleic acid is labeled with a high sensitivity. The results of this study indicate that this method can be used to detect and analyze ultra-high-sensitivity nucleic acids.