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核酸検出に用いる新規水溶性化学発光高分子プローブの創製

创建用于核酸检测的新型水溶性化学发光聚合物探针

基本信息

批准号：
14657572
负责人：
甲斐雅亮
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究課題の目的は、DNA検出用の新たな超高感度プローブを創製することである。研究代表者らは、昨年度の研究において、多糖分子に、水溶性を損なうことなく低分子量の化学発光物質であるルミノールまたはイソルミノールを多数結合させる強発光性高分子の合成手法を確立した。本年度は、平均分子量200万のデキストラン分子[(Glc)_<12300>]に、まずルミノール(Lu)、又は、イソルミノール(Ilu)を結合させた(Ilu)_<3700>-(Glc)_<1230>及び(Lu)_<1900>-(Glc)_<12300>を合成し、分光学的測定値を比較した。その結果、両高分子の蛍光強度は遊離のルミノールやイソルミノールの約60-80倍の強度しか得られなかったが、化学発光強度は、(Ilu)_<3700>-(Glc)_<12300>では遊離のイソルミノールの7700倍を示し、(Lu)_<1900>-(Glc)_<12300>では遊離のルミノールの210倍を示した。このことから、デキストランに導入する低分子量化学発光物質としてはイソルミノールの方が優れていることが示唆された。また、溶液中のこれらの発光性高分子の化学発光の検出感度は、蛍光のそれよりも約100倍高く、約2×10^<-16>molの検出限界(S/N=2)を示した。次に、イソルミノールとビオチン(Bio)の結合数をコントロールした3種の化学発光性デキストラン分子、(Ilu)_<850>-(Bio)_<330>-(Glc)_<12300>、(Ilu)_<600>-(Bio)_<660>-(Glc)_<12300>及び(Ilu)_<400>-(Bio)_<1100>-(Glc)_<12300>を合成した。DNAのハイブリダイゼーションアッセイ用のナイロン膜にスポットした時、等モルのそれらの化学発光強度は、分子中のイソルミノールの結合比にほぼ相応していた。さらに、これらの化学発光性デキストランは、分子中のビオチンを介して膜上のアビジンと結合して、特異的に化学発光スポットを与えた。以上のことから、本研究で開発した化学発光性デキストラン分子は、アビジンに特異的に結合し、超高感度な発光プローブとしての適用が期待できる。

The purpose of this study is to create a novel method for DNA detection. The research representative established the synthetic method of high light-emitting polymer with high molecular weight, high molecular weight and high molecular weight. This year, the average molecular weight of 2 million molecules [(Glc)_<12300>],[(Lu)],[(Ilu)] and <3700><1230>[(Lu)<1900>_(Glc)_<12300>] were synthesized and analyzed. As a result, the luminous intensity of the polymer is about 60-80 times higher than that of the free polymer, and the chemical luminous <3700>intensity is <12300>7700 times <1900>higher than that of the free polymer, and <12300>210 times higher than that of the free polymer. The introduction of low molecular weight light emitting chemicals into the environment The sensitivity of chemical emission of light-emitting polymers in solution is about 100 times higher than that of light-emitting polymers, and the <-16>detection limit (S/N=2) of about 2×10^ mol is shown. Three kinds of optically active molecules,(Ilu)_ -(Bio)_ -(Glc)_,(Ilu)_<850>-(Bio)_<330>-(Glc<12300><600><660>)_<12300>and (Ilu)_<400>-(Bio)_<1100>-(Glc)_<12300>were synthesized. The chemical emission intensity of DNA and the binding ratio of DNA and DNA in DNA are different. In addition, the chemical emission characteristics of the molecules are different from those of the molecules. This study is intended to explore the application of chemically sensitive light emitting molecules to specific light emitting and ultra-sensitive light emitting molecules.