腸管の高分子吸収細胞M-cellのモデル系構築と吸収機能制御因子の探索

肠道大分子吸收细胞M-cell模型体系的构建及吸收功能调节剂的寻找

• 批准号: 17658061
• 负责人: 清水 誠
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17658061/
• 关键词: 腸管細胞; M細胞; 高分子吸収; 細胞培養; 機能性食品

腸管上皮細胞としてヒト由来Caco-2を、免疫系細胞としてヒト由来のRaji B細胞、単球系THP-1細胞を用い、透過性膜上の腸管細胞と免疫細胞を共培養することによって蛍光ラテックスビーズの細胞層透過性が上昇するか検討した。Caco-2の基底膜側にRaji細胞を加えて共培養する系で、Caco-2細胞層の一部に蛍光ビーズの透過性が上昇するものが見出された。そこで、より安定な成績が得られることを期待して、共培養ではなく、免疫系細胞の培養上清を用いた実験系を再構築した。Caco-2細胞層の基底膜側チャンバーにRaji B細胞の培養上清を希釈して加えて4日間培養した。その後、蛍光ビーズを用いてCaco-2細胞層の高分子透過性亢進の有無を観察したところ、一部のウェルでビーズの透過性が数倍〜10倍程度上昇した。またそのようなウェルでは、M細胞のマーカーとして知られるSialyl-Lewis A抗原を発現している細胞の存在が認められたが、その割合はきわめて低いものであった。次いで、蛍光ビーズ透過性亢進が見られた細胞層からmRNAを回収し、DNAマイクロアレイ(約47,000遺伝子)を用いて遺伝子発現の変化を観察した。変動の見られた遺伝子約300を解析したところ、発現上昇を示したものには転写翻訳に関わる遺伝子が、また発現抑制が見られたものにはMg結合タンパク質など金属とかかわりのあるタンバク質の遺伝子が多く認められたほか、細胞内シグナル伝達に関わるある種のタンパク質の関与も示唆された。しかし、M細胞様に分化するのは培養細胞のうちのほんの一部であり、M細胞の機能解析を行う実験用細胞株としては、さらなる工夫が必要と考えられた。我々の研究室ではマウス上皮細胞が培養可能になったことから、マウスの上皮細胞とパイエル板細胞の共培養系によりM細胞様機能を持つ細胞取得を試みる予定である。

Intestinal epithelial cells are derived from Caco-2, immune system cells are derived from Raji B cells and monoglobulin THP-1 cells were used, and intestinal cells and immune cells were co-cultured on the permeable membrane. Raising することによって荍光ラテックスビーズのcell layer permeability がrise するか検した. The basal membrane side of Caco-2 is a Raji cell co-culture system, and the Caco-2 cell layer is a part of the basal membrane side.そこで, より stabilization results, られる, ことをanticipation, して, co-culture ではなく, immune system cells のculture supernatant をreconstructed with いた system を. The culture supernatant of Raji B cells on the basement membrane side of the Caco-2 cell layer was added and cultured for 4 days.その后、荍光ビーズを Use いてCaco-2 cell layer's polymer permeability is increased. The permeability of the first part of the watch has been increased several times to 10 times. Sialyl-Lewis A-antigens are present and present in the cells, and the existence of the cells is recognized and recognized. Sub-いで、荍光ビーズTransmittance hypersensitivityが见られたCell layerからmRNAをrecoveryし、DNAマイクロアレイ(approximately 47,000 伝子) is a いて弝子発発成の変化を観看した.変动の见られた缝子about 300をanalyticsしたところ、発 appearriseをshowしたものには転WRITTEN 訳に关わる伝子が、また発appears to suppress が见られたものにはMgcombinationタンパク性などmetalとかかわりのあるタンバク性の缝子が多く recognized められたほか、Intracellular シグナル伝达に关わるあるkind of のタンパク性の关 and も时攆された. Differentiation of M cells, M cells The functional analysis was carried out using cell lines and the necessary time and effort. We can culture epithelial cells in our laboratory, and we can cultivate epithelial cells in our lab The co-culture system of パイエエル plate cells, によりM cells, and the function of maintaining the cells are obtained and the test is scheduled to be carried out.