Analysis of sensor proteins which regulates mitochondrial dynamics in skeletal muscle
调节骨骼肌线粒体动力学的传感器蛋白分析
基本信息
- 批准号:21K19066
- 负责人:
- 金额:$ 4.16万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
- 财政年份:2021
- 资助国家:日本
- 起止时间:2021-07-09 至 2024-03-31
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
本年度は、昨年度に構築したスクリーニング方法(蛍光タンパク質をレポーターとした新たな実験系)により、shRNAライブラリーを用いた筋ミトコンドリアダイナミクス調節因子の発現を制御する新たな発現制御因子の探索実験を行った。ミトコンドリアダイナミクス調節因子の遺伝子発現調節領域(プロモーター領域及びエンハンサー領域)のレポーターを恒常的に発現するヒト骨格筋細胞株を樹立し、shRNAライブラリーを発現させるレンチウイルスを感染させ、薬剤により感染した細胞のみを抽出した。これらの細胞をFACSを用いて蛍光強度(プロモーター、エンハンサーの活性)が増加、もしくは低下する細胞を選別した。これらの細胞よりゲノムDNAの抽出・精製を行った。今回用いたshRNAライブラリーは標的遺伝子のshRNA配列に加え、該当遺伝子に対応するバーコード配列が含まれている。shRNA部分のDNA配列解析は困難であることが多いため、バーコード配列を標的としたDNA配列を標的とした次世代シーケンサー解析を行った。配列依存的にPCR増幅効率が異なることが予想されたため、PCRのサイクル数を最低限(15サイクル前後)、かつ次世代シーケンサーで解析可能な十分なDNA量が得られるPCRの実験条件を慎重に最適化した。本サンプルを用いて、バーコード配列を標的とした次世代シーケンサーを用いた配列解析を行っい、候補遺伝子の選定を行った。
This year's annual に は, yesterday to construct し た ス ク リ ー ニ ン グ method (蛍 light タ ン パ ク qualitative を レ ポ ー タ ー と し た new た な be 験 department) に よ り, shRNA ラ イ ブ ラ リ ー を with い た reinforcement ミ ト コ ン ド リ ア ダ イ ナ ミ ク ス adjustment factor の 発 now を suppression す る new た な 発 suppression factor の now explore be 験 を line っ た. ミ ト コ ン ド リ ア ダ イ ナ ミ ク ス adjustment factor の posthumous son 伝 発 now adjust field (プ ロ モ ー タ ー field and び エ ン ハ ン サ ー) の レ ポ ー タ ー を constant に 発 now す る ヒ ト skeletal muscle cell lines を し, shRNA ラ イ ブ ラ リ ー を 発 now さ せ る レ ン チ ウ イ ル ス を infection さ せ, 薬 tonic に よ り infection し た cells の み を smoke Out of た. こ れ ら を の cells both FACS を with い て 蛍 light intensity (プ ロ モ ー タ ー, エ ン ハ ン サ ー の activity) が raised addition, も し く は low す を る cells choose don't し た. <s:1> れら <s:1> cells よ ゲノム ゲノムDNA samples extracted and refined を rows った. This reuse い た shRNA ラ イ ブ ラ リ ー は mark heritage 伝 son の shRNA match column に plus え, should have 伝 に 応 seaborne す る バ ー コ ー ド match column が containing ま れ て い る. ShRNA part の DNA match column analysis は difficult で あ る こ と が more い た め, バ ー コ ー ド match column を mark と し た DNA match column を mark と し た nextgen シ ー ケ ン サ ー parsing line を っ た. Column dependent に PCR rights of working ratio が different な る こ と が to think さ れ た た め, PCR の サ イ ク ル number を floor (15 サ イ ク ル) before and after, か つ nextgen シ ー ケ ン サ ー で parsing may な very が な DNA quantity have to ら れ る PCR の be を 験 conditions carefully に optimization し た. This サ ン プ ル を with い て, バ ー コ ー ド match column を mark と し た nextgen シ ー ケ ン サ ー を with い た match column line analytical を っ い, alternate but 伝 の を selected rows っ た.
项目成果
期刊论文数量(0)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
大豆タンパク質βコングリシニンによる代謝改善効果
大豆蛋白β-伴大豆球蛋白的代谢改善作用
- DOI:
- 发表时间:2022
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Suzuki Toshihide;Shimizu Makoto;Yamauchi Yoshio;Sato Ryuichiro;清水誠
- 通讯作者:清水誠
Pathophysiological levels of GDF11 activate Smad2/Smad3 signaling and induce muscle atrophy in human iPSC-derived myocytes
GDF11 的病理生理水平激活 Smad2/Smad3 信号传导并诱导人 iPSC 衍生的肌细胞肌肉萎缩
- DOI:10.1152/ajpcell.00341.2022
- 发表时间:2022
- 期刊:
- 影响因子:5.5
- 作者:Honda Mikako;Makino Takumi;Zhao Xiaolin;Matsuto Mariko;Sakurai Hidetoshi;Takahashi Yu;Shimizu Makoto;Sato Ryuichiro;Yamauchi Yoshio
- 通讯作者:Yamauchi Yoshio
低タンパク質誘導性脂肪肝を制御する新たな転写因子の同定
控制低蛋白诱导脂肪肝的新转录因子的鉴定
- DOI:
- 发表时间:2021
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:清水誠;鄭力榕 ;不野歩美;梅村真理子;高橋勇二;山内祥生;佐藤隆一郎
- 通讯作者:佐藤隆一郎
Comparison of gene expression and activation of transcription factors in organoid-derived monolayer intestinal epithelial cells and organoids
类器官来源的单层肠上皮细胞和类器官中基因表达和转录因子激活的比较
- DOI:10.1093/bbb/zbab136
- 发表时间:2021
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Takahashi Yu;Inoue Yu;Kuze Keitaro;Sato Shintaro;Shimizu Makoto;Kiyono Hiroshi;Yamauchi Yoshio;Sato Ryuichiro
- 通讯作者:Sato Ryuichiro
Orange peel extract reduces the inflammatory state of skeletal muscle after downhill running via an increase in IL-1RA
- DOI:10.1093/bbb/zbab049
- 发表时间:2021-03-19
- 期刊:
- 影响因子:1.6
- 作者:Suzuki, Toshihide;Shimizu, Makoto;Sato, Ryuichiro
- 通讯作者:Sato, Ryuichiro
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清水 誠其他文献
条件制御の能力を高める指導方法の研究-児童が考えた実験を取り組ませることの効果-
提高控制条件能力的教学方法研究 -让孩子们进行自己设计的实验的效果-
- DOI:
- 发表时间:
2007 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
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紺野雅弘・清水誠・吉井規雄
The Neverending Adoration and Idolization of Goethe
对歌德永无休止的崇拜和崇拜
- DOI:
- 发表时间:
2002 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
井戸田総一郎;Soichiro Itoda;井戸田総一郎;井戸田総一郎;Soichiro Itoda;井戸田総一郎;Soichiro Itoda;Soichiro Itoda;原 克;Soichiro Itoda;原 克;Soichiro Itoda;原克;Soichiro Itoda;清水 誠;井戸田総一郎;清水 誠;Soichiro Itoda;原 克(単著);Soichiro Itoda - 通讯作者:
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German as a Germanic Language (10) : Strong Verbs, Preterite-Present Verbs and Vowel Gradation
德语作为日耳曼语言(10):强动词、过去现在动词和元音分级
- DOI:
10.14943/bfhhs.169.l1 - 发表时间:
2023 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
SHIRAI;Satoko; NAGANO;Yasuhiko;堀 博文;戸塚学;清水 誠 - 通讯作者:
清水 誠
満州アウトバーン計画 ベルリン発、東京経由、ハルピン行き
柏林经东京至哈尔滨的满洲高速公路计划
- DOI:
- 发表时间:
2005 - 期刊:
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- 作者:
HARA;Katsumi;清水 誠;原 克;清水 誠;原 克 - 通讯作者:
原 克
骨格筋萎縮における抗肥満ホルモンFGF21の発現制御機構および機能解析
抗肥胖激素FGF21在骨骼肌萎缩中的表达调控机制及功能分析
- DOI:
- 发表时间:
2021 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
川邊 充希;清水 誠;三浦 雄也;橋詰 力;山内 祥生;佐藤 隆一郎 - 通讯作者:
佐藤 隆一郎
清水 誠的其他文献
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老化細胞除去を基軸とした新たな抗老化食品成分の創製
基于去除衰老细胞创造新的抗衰老食品成分
- 批准号:
23K26849 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 4.16万 - 项目类别:
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Study of anti-aging food factors which activate senolysis
激活衰老作用的抗衰老食物因子的研究
- 批准号:
23H02156 - 财政年份:2023
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$ 4.16万 - 项目类别:
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ゲルマン語類型論から見たドイツ語の新しい構造記述
日耳曼语言类型学视角下的德语新结构描述
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19K00540 - 财政年份:2019
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$ 4.16万 - 项目类别:
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カーボンナノ粒子の腸管吸収と細胞応答
碳纳米粒子的肠道吸收和细胞反应
- 批准号:
20658033 - 财政年份:2008
- 资助金额:
$ 4.16万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
食物質による腸管上皮トランスポートソーム制御の機能的解析
膳食物质对肠上皮转运体调节的功能分析
- 批准号:
20056006 - 财政年份:2008
- 资助金额:
$ 4.16万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
無機有機複合層状半導体におけるトリエキシトンの探求
探索无机-有机复合层状半导体中的三激子
- 批准号:
19740188 - 财政年份:2007
- 资助金额:
$ 4.16万 - 项目类别:
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肠道大分子吸收细胞M-cell模型体系的构建及吸收功能调节剂的寻找
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$ 4.16万 - 项目类别:
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$ 4.16万 - 项目类别:
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牛磺酸调节脂肪细胞分化和细胞因子产生
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15658041 - 财政年份:2003
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$ 4.16万 - 项目类别:
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$ 4.16万 - 项目类别:
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相似海外基金
女性ホルモンが関与するミトコンドリアを中心としたオルガネラ連関による骨格筋適応
通过以涉及雌性激素的线粒体为中心的细胞器相互作用进行骨骼肌适应
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24K02827 - 财政年份:2024
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22K19607 - 财政年份:2022
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Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
2型糖尿病の筋力低下を防止する骨格筋ミトコンドリアの新たな制御機構の解明
阐明骨骼肌线粒体的新调节机制,可预防 2 型糖尿病患者的肌肉无力
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22K17745 - 财政年份:2022
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骨格筋のミトコンドリア増減に関与する局所因子と体液性因子の影響
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22K11600 - 财政年份:2022
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骨格筋におけるPGC-1αを介したカルジオリピン生合成機序の解明
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22K17831 - 财政年份:2022
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$ 4.16万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
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21H03332 - 财政年份:2021
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生活習慣の乱れによる骨格筋機能低下の機序解明
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骨骼肌线粒体结构与年龄相关的变化以及运动的影响
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骨格筋の運動適応に関与する長鎖ノンコーディングRNAの同定とその生理機能
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$ 4.16万 - 项目类别:
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