脳の性分化を規定する遺伝子群の探索と機能解析

调节大脑性别分化的基因组的搜索和功能分析

• 批准号: 17659354
• 负责人: 久下 英明
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Kochi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659354/
• 关键词: 神経突起; N型糖鎖; 脳の性分化; PCl2細胞; 糖蛋白質

Masculinの蛋白機能を明らかにするために、PC12細胞にMasculinを強制発現し以下の成果を得た。1.培養下で神経様細胞へ分化誘導できるPC12細胞にMasculinを強制発現し細胞レベルでの蛋白機能解明を行った。Masculinを強制発現すると、PC12細胞はNGFの非存在下においても著しい形態変化を起こし神経突起様の伸展を起こす事を観察した。さらに神経軸索のマーカーであるニューロフィラメントLが本蛋白質によって誘導され、軸索にそって発現することを見出した。以上の結果は、Masculinの神経細胞分化調節における機能を示唆している。またMasculinの細胞内分布を間接蛍光抗体法により観察すると、突起先端部に集中して局在し、かつドット状に分布することがわかった。これを生化学的に分画することにより本蛋白質が膜蛋白であることを明らかにした(2006年度 国際生化学分子生物学会発表)。2.Masculin蛋白質の糖鎖解析PC12細胞にMasculin蛋白質を発現しウエスターン解析すると、アミノ酸配列から予想される分子量より大きい位置に分子量の広がった蛋白質が検出された。またアミノ酸配列から糖鎖付加が予想された。そこでN型糖鎖を除く各種酵素を用いて解析することにより、PC12細胞に発現したMasculin蛋白質はコンプレックス型糖鎖を持つ糖蛋白質であることを明らかにした。さらに5箇所ある糖鎖付加候補部位に個別に点変異を導入することによりアミノ酸番号215、282、300の三箇所に糖鎖が付加していることを同定した(2006年度 国際生化学分子生物学会発表)。

为了阐明男性蛋白的蛋白质功能，我们强迫男性蛋白在PC12细胞中表达，从而获得以下结果。 1。男性素被迫在PC12细胞上表达男性素，这些男性可以在培养下诱导分化为神经样细胞，并在细胞水平上阐明了蛋白质功能。我们观察到，男性素的强迫表达在PC12细胞中引起了显着的形态变化，即使在没有NGF的情况下，也会引起神经突的延伸。此外，发现神经丝L是神经轴突的标记，该蛋白质诱导并沿轴突表达。以上结果表明男性素在调节神经元分化中的作用。此外，当通过间接荧光免疫测定观察男性素的细胞内分布时，发现它被浓缩并定位在突起的尖端并以点状的方式分布。通过对此进行生物化学分馏，可以发现该蛋白是一种膜蛋白（在国际生化和分子生物学学会中介绍，2006年）。 2。当男性蛋白在PC12细胞中表达男性蛋白并进行了Westan分析时，男性蛋白的糖合成，分子量扩散到比氨基酸序列的预期分子量大的位置的蛋白。此外，从氨基酸序列预测糖基化。因此，通过使用各种酶进行分析，除了N型聚糖外，可以发现在PC12细胞中表达的男性蛋白是具有复杂聚糖的糖蛋白。此外，通过在五个候选位点单独引入点突变以进行糖基化，可以鉴定出糖基化已添加到三个位置，即氨基酸数字215、282和300（介绍国际生物化学和分子生物学学会，2006年）。