単独ベクターで産生量制御が可能な翻訳調節発現ベクターの開発

开发可以用单个载体控制生产的翻译调节表达载体

• 批准号: 19659071
• 负责人: 久下 英明
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Kochi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19659071/
• 关键词: 翻訳調節; 発現ベクター

フェリナンの翻訳調節機構を応用した調節発現ベクターを構築するため、アコニターゼ結合部位を翻訳開始コドン上流にそれぞれ1個、3個または5個直列に持う発現ベクターを、CMVプロモーターとネオマイシン耐性遺伝子を持つ哺乳動物用発現ベクターを用いて構築した。との汎用ベクターに発現蛋白質の定量を行うため、ルシフェラーゼ遺伝子を挿入したレポーターベクターを構築した。このレポーター発現ベクターをCHO細胞、COS細胞に導入し、培養液に加える鉄イオン濃度をHemeまたは鉄イオンキレーターであるdesferrioxamineを用いて各々濃度を0〜100μMに変化させた上で、ルシフェラーゼ活性を用いて発現制御の定量評価を行った。その結果、アコニターゼ結合部位を3個または5個持つ発現ベクターを一過性に導入した場合、CHO細胞、COS細胞ともにdesferrioxamineを用いて鉄イオンをキレートした条件に対して、Hemeを100μM添加した条件で2.2倍の活性上昇がみられた。予想より低い活性制御がルシフェラーゼ遺伝子の安定性に起因する可能性を検討するため、ルシフェラーゼレポーター遺伝子がより短時間で代謝されるタイプに変更して検討した結果、鉄イオンをキレートした条件に対して、Hemeを100μM 添加した条件で2.8倍の活性上昇がみられ、わずかながら活性制御が上昇した。汎用調節発現ベクターとして広く用いられるためには、発現制御が少なくとも、10倍以上必要と考えられる。以上の結果により、フェリチンの翻訳調節機構を応用した調節発現ベクターを広く用いられるようにするためには、さらに工夫が必要であることがわかった。

The regulation mechanism for the development of the disease is composed of 1, 3 and 5 in-line mechanisms for the development of the disease, CMV and the development of the resistance gene for mammals. The quantitative analysis of protein was carried out by using the method of quantitative analysis. The concentration of iron and desferrioxamine in CHO cells, COS cells, culture medium and medium was 0 ~ 100μM, and the activity of iron and desferrioxamine was quantitatively evaluated. The results showed that there were 3 binding sites and 5 persistent binding sites. When CHO cells and COS cells were introduced transiently, the activity of desferrioxamine increased by 2.2 times when Heme was added to 100μM. In order to investigate the possibility of the cause of the stability of the low activity control protein, the low activity control protein and the low activity The general regulation of the development of the use of small, 10 times more than the necessary test As a result of the above, it is necessary to use the toggle adjustment mechanism to adjust and realize the object in a wide range of applications.