ビタミンEを用いたsiRNAの脳への新しいデリバリー法の開発

开发使用维生素 E 将 siRNA 递送至大脑的新方法

• 批准号: 18650103
• 负责人: 叶内 匡
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18650103/
• 关键词: RNAi; ビタミンE; 遺伝子治療

(1)α-トコフェロール結合siRNAの作製センス鎖・アンチセンス鎖とも27塩基のホタルルシフェラーゼ遺伝子に対するsiRNAをデザインした。また、α-トコフェロールをアミダイト化したものを作成した。センス鎖合成の際、5‘末端にα-トコフェロールをアミダイト結合し、アンチセンス鎖とアニーリングしてα-トコフェロール結合siRNAを作成した。(2)ニューロンの初代培養細胞に対するα-トコフェロールベクターを用いたsiRNAの導入マウスニューロンの初代培養細胞に対して、ホタルルシフェラーゼに対するα-トコフェロールを結合したsiRNAを培養液中に加えた。3時間後に培養液を交換し、ホタルルシフェラーゼとウミシイタケルシフェラーゼのそれぞれの発現ベクターを、リポフェクタミン試薬を用いてトランスフェクションした。24時間後に初代培養細胞での両ルシフェラーゼの発現量をアッセイしたところ、他の遺伝子に対するα-トコフェロール結合siRNAを加えた場合と比較してホタルルシフェラーゼに対するα-トコフェロール結合siRNAを加えた群ではホタルルシフェラーゼの発現が有意に60%程度低下しており、α-トコフェロール結合siRNAがニューロンの初代培養細胞でも有効に発現していることが確認できた。(3)α-トコフェロールベクターを用いたsiRNAの導入の確認マウス肝臓の培養細胞系であるHepa1-6に対し、α-トコフェロールを結合したsiRNAを培養i液中に加えた。24時間後に細胞を回収して、ターゲットのsiRNAの検出をノザンプロットで行ったところ、21塩基と27塩基のセンス鎖がいずれも細胞内に存在することが確認できた。このことから、加えたα-トコフェロール結合siRNAが細胞内でDicerに認識されて切断されていることが分かり、実際に細胞内にデリバリーされていることが定性的に確認できた。

(1)α-siRNA binding to siRNAs can be achieved by targeting siRNAs to 27-mer siRNAs. The first step is to make a decision. 5 '-terminal α-terminal siRNAs were prepared by binding to α-terminal siRNAs. (2)Introduction of siRNA into primary culture cells of the cell line After 3 hours, the culture solution was exchanged, and the mixture was used to prepare the test solution. After 24 hours, the expression of α-siRNA in primary cultured cells was increased by 60% compared with α-siRNA in primary cultured cells. α-siRNA binding to primary cultured cells was identified (3)Confirmation of siRNA introduction into Hepa1-6 cultured cell line using α-siRNA After 24 hours, the cells returned to normal and the siRNA was detected in the cells. This is the first time that we've seen this.

项目成果

siRNAの核酸医薬としての可能性

siRNA作为核酸药物的潜力

• 发表时间: 2006
• 期刊: 分子細胞治療 5
• 作者: Song Z;Suzuki K;et. al.;横田隆徳;横田隆徳
• 通讯作者: 横田隆徳

RNA干渉によるアルツハイマー病治療の可能性

利用 RNA 干扰治疗阿尔茨海默病的可能性

• 发表时间: 2006
• 期刊: Progress in Medicine 26
• 作者: Uezu A.;Horiuchi A.;Araki N.;et.al.;佐藤靖史;横田隆徳
• 通讯作者: 横田隆徳

siRNAを用いたALSの遺伝子治療

使用 siRNA 治疗 ALS 的基因疗法

• 发表时间: 2007
• 期刊: 医学のあゆみ。 (印刷中)
• 作者: Kosaka H.;Yoshimoto T.;Fujimoto J.;et.al.;横田隆徳
• 通讯作者: 横田隆徳

Increase of disease duration of amyotrophic lateral sclerosis in a mouse model bytransgenic small interfering RNA.

通过转基因小干扰RNA延长小鼠模型中肌萎缩侧索硬化症的病程。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Archives Neurology 64
• 作者: Yokota T;Sasaguri H;Saito Y;Yamada H;Unno N;Yamamoto T;Kubodera T;Anzai M;Mitani T;Mizusawa H.
• 通讯作者: Mizusawa H.

神経変性疾患のサイエンス

神经退行性疾病科学

• 作者: Watanabe;M;Shingo Kikuchi;Wataru Yamori;Kozo Morimoto;Toshiki Yabe;Toshiki Yabe;菊地 真吾;Toshiki Yabe;Shingo Kikuchi;Wataru Yamori;H.A.Popiel;I.Mizuta;H.Xiong;T.Chiyonobu;N.Fujikake;S.Kariya;Y.Nagai;I.Mizuta;水澤英洋;葛原茂樹;高橋良輔
• 通讯作者: 高橋良輔