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あらゆる遺伝子を標的にできるsiRNAトランスジェニックマウスの新規作製方法

一种创建可靶向任何基因的 siRNA 转基因小鼠的新方法

基本信息

批准号：
19650103
负责人：
叶内匡
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19650103/
关键词：
siRNA トランスジェニックマウス shRNA SOD1 モデルマウス shRNA毒性

项目摘要

抑制効果の異なる複数のESクローンからTgマウスを作製し、ES細胞レベルで1ucifbrase assayによって得られた抑制効果が、マウスレベルでの抑制効果を反映していることを確認するために、SODl-siRNA発現ES細胞のうち、抑制効果が低いクローン(#7)、中等度のクローン(#8、27)、高いクローン(#23)を用い、従来と同じ方法(図2)で計4ラインからそれぞれのキメラマウスを作製した。このオスキメラマウスとメスC57/B6とを体外受精も含めて掛け合わせてF1:siRNATgマウスを試みたが、産児のすべてにトランスジーンが確認できなかった。ES細胞の保存期間が2年を過ぎたことに原因がある可能性を考え、再度SOD1-siRNAをマウス 129 系 ES 細胞にelectroporation して有効なクローンを得ている。また、平行してES細胞に未発現のアンギアゲニン遺伝子を標的としたsiRNAを設計し、ES細胞に導入後、アンギアゲニン遺伝子とRenilla luciferase遺伝子を融合した発現ベクターをco-transfection し、luciferase assayを行うことにより、ES細胞レベルの抑制効果を評価し、抑制効果の得られたES細胞が選択できて、そのキメラマウスが作製できた。しかし、このキメラマウスからもいままでのところgermline transmissionが確認できていない。これらの原因としてshRNA毒性による精子形成に障害がある可能性を考えて、現在polII系promotor下にmiRNA backboneのshRNAを設計して、新たなRNAiトランスジェニックマウスの作製を始めた。

Inhibitory effect of multiple ES gene expression, ES cell cycle, 1ucifbrase assay, inhibition effect, SODl-siRNA, ES cell cycle, inhibition effect, low level (#7), medium level (#8,#27), high level (#23) The same method (2) is used to calculate the number of times the number of times C57/B6 in vitro receptor ES cell preservation period is 2 years, the reason is too long, the possibility is too long, the SOD1-siRNA is too long, the ES cell preservation period is too long, the reason is too long, the possibility is too long, the SOD1-siRNA is too long, the reason is too long, the possibility is too long, the SOD 1-siRNA is too long, the possibility is too long In parallel, siRNA targeting ES cells was designed. After ES cells were introduced, siRNA targeting Renilla luciferase gene was fused to ES cells. ES cells were evaluated for inhibition effects. ES cells were selected for inhibition effects. This is the first time I've ever seen a transmission. The reasons for this and the possibility of inhibiting sperm formation due to shRNA toxicity are discussed. The design of miRNA backbone shRNA under polII promoter is now under way.

项目成果

期刊论文数量（4）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Increase of disease duration of amyotrophic lateral sclerosis in a mouse model bytransgenic small interfering RNA.

通过转基因小干扰RNA延长小鼠模型中肌萎缩侧索硬化症的病程。

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
Archives Neurology 64
影响因子：
0
作者：
Yokota T;Sasaguri H;Saito Y;Yamada H;Unno N;Yamamoto T;Kubodera T;Anzai M;Mitani T;Mizusawa H.
通讯作者：
Mizusawa H.

Efficient in vivo delivery of siRNA to the liver by conjugation of α-tocopherol