生体膜間オリゴ糖輸送におけるキャリアリピドのフリップ-フロップ転移過程の分子解析

生物膜间寡糖转运过程中载体脂质翻转过程的分子分析

基本信息

批准号：
18655067
负责人：
古山種俊
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

真正細菌のペプチドグリカン層やリポ多糖などの生合成においては、糖キャリア脂質と呼称されるポリプレニルリン酸が親水性のペンタペプチドオリゴ糖などの輸送体として機能しており、高度に疎水的なリン脂質で構成される細胞膜間の動的反転輸送を行なっている。この、フリップ・フロップと呼ばれる細胞膜間の動的糖鎖輸送によって、細胞質で生合成された親水性のペンタペプチドオリゴ糖などを細胞表面にフリップ・フロップ輸送した後に、ウンデカプレニルリン酸の細胞質側への回収反応を触媒する酵素が存在しないと、細菌の高度に効率的な細胞分裂に伴う生活環を維持できない。この糖キャリア脂質の回収のためのフリップ・フロップ反応の存在を証明するために、NBD基を蛍光団とした蛍光ラベル基質を合成した。この蛍光プローブ基質を用いて、生体脂質二重膜の内層および外層に蛍光プローブ基質を導入させた後インキュベーションし、さらにジチオナイトを添加して細胞外層表面の蛍光を消失させ、その状態における蛍光光度を定量化することによる回収反応の測定法を確立したので、この測定法を枯草菌Bacillus Subtilisの細胞膜の内側に取り込ませたプローブの蛍光強度から蛍光プローブの取り込み活性を評価した。この系にトリプシンを添加してプロテアーゼ処理を行うと、プローブの取り込み活性が低下したが、この系にプロテアーゼ阻害薬を加えると取り込み活性の低下は回復した。このことから、このプローブの取り込み過程にはある種のタンパク質が関与していることを示唆する証明がなされた。

在肽聚糖层和脂多糖的生物合成中，聚丙烯基磷酸盐（称为糖载体脂质）充当亲水性戊二肽寡糖的转运蛋白，以及在高度磷脂中的细胞膜之间动态倒入的运输，并具有动态倒置的运输。如果没有酶可以通过细胞膜之间的动态聚糖传输（称为触发器），等等，在高度效应的细胞体中，在高度效率上，催化了由细胞膜（称为触发器）的细胞膜（称为触发器）之间的动态聚糖转运（称为触发器）的恢复反应，等等，在高度效率上，在高度效率上，在高度的细胞体中，无法生存量。为了证明存在该糖载体脂质的触发器反应的存在，合成了荧光小组作为荧光团的荧光标签底物。使用此荧光探针底物，将荧光探针底物引入到生物脂质双层膜的内部和外层中，然后孵育，然后添加二硫酸含量，以消除外部细胞层表面上的荧光，并在此状态下量化液体。该测量方法用于评估荧光探针的摄取活性，该探针的荧光强度在枯草芽孢杆菌的细胞膜内接收的探针的荧光强度。当将胰蛋白酶添加到该系统和蛋白酶处理中时，探针的摄取活性减少，但是当将蛋白酶抑制剂添加到该系统中时，恢复了摄取活性的降低。这证明某些蛋白质参与了该探针的摄取过程。

项目成果

期刊论文数量（17）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Novel fluorescent analogues for transmembtrane movement study of polyprenyl phosphates

用于聚异戊二烯磷酸酯跨膜运动研究的新型荧光类似物

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
Bioorg. Med. Chem. Lett. 17
影响因子：
0
作者：
Tamiyo KONDO;近藤民代;近藤民代;近藤民代;K. Fujikura;K. Koseki;A. Phatthiya;K.Koseki
通讯作者：
K.Koseki

Structure and function of cis-prenyl chain elongating enzymes

DOI：
10.1002/tcr.20083
发表时间：
2006-01-01
期刊：
CHEMICAL RECORD
影响因子：
6.6
作者：
Takahashi, Seiji;Koyama, Tanetoshi
通讯作者：
Koyama, Tanetoshi

Novel fluorescent analogues for transmembrane movement study of polyprenyl phosphates

用于聚异戊二烯磷酸酯跨膜运动研究的新型荧光类似物

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
Bioorg. Med. Chem. Lett. 17
影响因子：
0
作者：
伊藤耕一;Takehiro Suzuki;Keitaro Fujikura;K. Fujikura;K. Fujikura;T. Suzuki;K. Koseki
通讯作者：
K. Koseki

Cloning and expression of the gene encoding solanesyl diphosphate synthase from Hevea brasiliensis