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細菌の細胞膜間糖輸送過程に関与する酵素フリッパーゼの実体の解明

阐明参与细菌膜间糖转运过程的翻转酶实体

基本信息

批准号：
12878109
负责人：
古山種俊
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12878109/
关键词：
プレニル鎖延長酵素ウンデカプレニル二リン酸プレニルトランスフェーラーゼフリップ-フロップ細胞膜生合成糖担体脂質フリッパーゼフリップ-フロッブ細菌細胞壁生合成ウンデカプレニルニリン酸ペプチドグリカン糖タンパク質生合成ドリコールリン酸プレニルトランスフェラーゼ

项目摘要

細菌の細胞壁の生合成は脂質中間体LiPid IIにおけるオリゴ糖鎖のコア構造が細胞質内で構築され、糖坦体リピドと結合したものが細胞内膜側から外膜側へ「フリップ-フロップ転移」されて、細胞表面でのペプチドグリカン層生合成に供給される。このオリゴ糖の膜間移送過程(フリップ-フロップ転移)は教科書レベルでも記述されているにも拘わらず、その過程に関与する酵素「フリッパーゼ」の実体は全く明らかになっていない。この過程に関与する糖坦体リピド、ウンデカプレニルリン酸の前駆体を合成する酵素、ウンデカプレニル二リン酸合成酵素(UPS)をシス型プレニル鎖延長酵素として初めてクローン化し、そのX線結晶構造解析に成功しているので、フリッパーゼの実態を解明し、その分子レベルでの解明の糸口を見出すことを本研究の目的とした。先ず、UPSの大量発現系を利用して、ウンデカプレニル二リン酸の大量合成系を確立し、UDP-MurNAc-pentapeptideをBacillus cereusの培養液から抽出し、Phospho-MurNAc-pentapeptide transferaseの発現系を構築して、LiPid Iの酵素的合成法の確立を試みたが、大量合成法は構築できなかった。そこで、ウンデカプレニルリン酸のリン酸基にアミノエチル基がジエステル結合した化合物を合成し、このアミノ基に蛍光発色団7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl基を導入した化合物を合成した。さらにこの化合物のプレニル基をファルネシル基、またはゲラニルゲラニル基に置換た化合物も合成し、ウンデカプレニルリン酸が細胞膜の外膜から内膜ヘフリップ-フロップ転移により回収される過程を追究することにした。現在、合成した化合物を大腸菌野生株W3110株より調整した細胞膜成分に効率よく導入する方法を検討中である。

The cell wall of the fungus was synthesized by LiPid II, the cell wall and the cell wall. in the cell wall, the cell wall was synthesized, the cell surface was synthesized, the intracellular membrane was synthesized, the outer membrane was transferred, and the cell surface was synthesized. The process of sugar transfer between sugar membranes is recorded and recorded in the process of glucose transfer between sugar membranes. The process of enzyme synthesis is related to the glycosylation, the synthesis of enzyme, the synthesis of enzyme (UPS), the growth of the enzyme, the analysis of X-ray crystal, the analysis of the structure of the enzyme, the analysis of the structure of the enzyme, the analysis of the structure and the structure of the enzyme. The purpose of this study is to understand the molecular structure of this study. First, UPS was used to make sure that a large number of compounds were synthesized, UDP-MurNAc-pentapeptide Bacillus cereus was extracted, Phospho-MurNAc-pentapeptide transferase was extracted, LiPid I enzymes were synthesized, and a lot of compounds were synthesized. The compound was synthesized by the synthesis of the compound, the synthesis of the compound and the synthesis of the compound. The compounds were synthesized, the adventitia of the outer membrane was detected, the adventitia was detected, the intima was transferred to the endothelium, and the process was investigated. At present, the rate of cell membrane components of wild strain W3110 was introduced into the method.