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小胞体での糖タンパク生合成における膜間オリゴ糖輸送機構の解明

阐明内质网糖蛋白生物合成中的膜间寡糖转运机制

基本信息

批准号：
14658198
负责人：
古山種俊
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14658198/
关键词：
ウンデカプレニル二リン酸ファルネシル二リン酸プレニルトランスフェラーゼドリコールポリプレノールフリップ-フロップ糖タンパク質生合成細胞壁生合成糖タンパク生合成フリッパーゼドリコールリン酸

项目摘要

ヒトの糖タンパク生合成における糖担体脂質、ドリコールの生合成前駆体合成に関与するデヒドロドリキル二リン酸合成酵素に直接特異的に相互作用するタンパク質を酵母系ツーハイブリッドシステムを用いて探索した結果、いくつかの候補タンパク質が同定されたが、ヒトのニーマン・ピック病に関連するNPC-2タンパクもデヒドロドリキル二リン酸合成酵素と特異的相互作用を示すことが明らかになった。「フリッパーゼ」の酵素活性測定法の確立のために、蛍光ラベルしたポリプレノールリン酸の合成を行い、この蛍光性プローブを用いて人工的に調整したリン脂質のリポソームでのポリプレノールリン酸の物理的拠動を追究した結果、ジチオナイトによってリポソームの外膜側の蛍光を消光し、蛍光プローブ量の変化の定量化を確立する過程で、ポリプレノールの炭素鎖長によってリン脂質膜内へのポリプレノール部の挿入状態が異なっていることが示唆された。大腸菌の細胞外多糖輸送に関わると予想される未知遺伝子群として、Wzxファミリー群のうち、WzxE、WzxC、MviN遺伝子の各欠失変異体を作製し、大腸菌細胞の生育に対する影響を調べた結果、いずれの欠失変異体においても細胞増殖速度に大きな変化は見られないが、フィラメント状の多核細胞の形成が観察されるようになった。このフィラメント状多核細胞はDAPI染色により核様体を染色すると、各細胞単位の核様体が直列に連なった形態であることが判明した。また、界面活性剤を添加することにより、大腸菌細胞は単細胞となることが明らかとなったので、各Wzxファミリー遺伝子の欠失により、細胞外膜構造の生合成に異状をきたした結果、細胞壁の強度が変化し、各大腸菌細胞が直列に連なる様になったことが示唆される。

The direct and specific interaction between sugar biosynthesis enzymes and sugar carrier lipids, sugar biosynthesis precursors and sugar biosynthesis enzymes in yeast systems was explored. NPC-2 is the most important enzyme in the human body. The establishment of enzyme activity assay method of "Lipids", the synthesis of Lipids, the use of Lipids, the artificial adjustment of Lipids, the physical activation of Lipids, the extinction of Lipids on the outer membrane side, the quantification of Lipids, the establishment of the process of Lipids The carbon chain in the lipid membrane is in a different state. The effects of different genes on the growth and development of E. coli cells were investigated. The results showed that the growth rate of E. coli cells was significantly reduced due to the changes in the expression of unknown genes, WzxE, WzxC and MviN genes. DAPI staining was used to determine the morphology of nucleosomes in each cell unit. In addition, the interface activity agent is added, the E. coli cells are separated from each other, the Wzx protein is lost, the outer membrane structure is produced and synthesized, the strength of the cell wall is abnormal, and the E. coli cells are connected in series.