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プレニルトランスフェラーゼの酵素活性発現機構

异戊二烯基转移酶酶活性的表达机制

基本信息

批准号：
07680620
负责人：
古山種俊
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究はイソプレノイドの生合成に重要な「プレニルトランスフェラーゼ」の構造と機能解明を目的として、下記の成果を得た。1. Bacillus stearothermophilusのファネシル二リン酸(C_<15>-PP)合成酵素について(1)部位特異的変異の導入によって(a)アリル性基質の結合に必須なアミノ酸残基として、保存領域VIのGlnが、(b)イソペンテニル二リン酸の結合に重要なアミノ酸残基として保存領域IとVに存在するLysおよび領域VIのDDxxDモチーフの最後のAspが同定できた。(c)触媒反応に直接関与している残基として保存領域VIのFQxxDDxxDモチーフの内のPhe,および1,2番目の2つのAspが同定され、特にPheは反応の律速段階であるアリル性カチオンの生成と安定化に寄与している可能性が示唆された。2. Bacillus stearothermophilusのヘプタプレニル二リン酸(C_<35>-PP)合成酵素遺伝子のクローニングプレニルトランスフェラーゼに特徴的な7つの保存領域の配列を考慮してプライマーを合成し、PCRによって増幅されるクローンを得、これをプローブとしてハイブリダイゼーションを行った結果、C_<35>-PP合成酵素遺伝子のクローン化に成功した。酵素の発現の有無を指標にしたクローンの特定化により、この酵素はヘテロサブユニット構造を持っていることが遺伝子レベルで証明できた。3. Micrococcus luteus B-P 26のヘキサプレニル二リン酸(C_<30>-PP)合成酵素遺伝子のクローニング2の場合と同様のプライマーを用いて、PCRやサザンバイブリゼーションを行って得たクローンをプローブとして、C_<30>-PP合成酵素遺伝子およびC_<15>-PP合成酵素遺伝子のクローン化に成功した。C_<30>-PP合成酵素は常に解離しているヘテロサブユニット構造を持つことが証明された。

The purpose of this study is to elucidate the structure and function of the synthetic biosynthetic products, and to achieve the results described below. 1.Bacillus stearothermophilus のファネシルdironic acid (C_<15>-PP) synthesis enzymeついて(1) Site-specific heterogeneity introduction によって(a) アリル-based matrix binding になアミノ acid residue として, preservation field VI Gln が, (b) イソペンテニルdiリン acid の binding になアミノ acid residue として protection Existence field IとVにExistenceするLysおよびField VIのDDxxDモチーフのlastのAspが同定できた. (c) The catalytic reaction is directly related to the preservation field of the している residue and the として VIのFQxxDDxxD モチーフの内のPhe, および1,2 Chapter 2つのAspが同定され、特にPheは Reflection応のtemporary speed stage であるアリル性カチオンのGeneration and stabilization に Send and しているpossibility がshows instigation された. 2.Bacillus Synthesis of stearothermophilus のヘプタプレニdipironic acid (C_<35>-PP) Consideration of the arrangement of the storage area of enzyme residues of enzymesしてプライマーを综合し、PCRによってincreased width されるクローンをget、これをプローブとしてハイAs a result of the ブリダイゼーションを line, the C_<35>-PP synthetic enzyme was successfully transformed into a のクローンに. The presence or absence of enzymes is an indicator of the specificity of enzymes and enzymes.テロサブユニットconstruct をhold っていることが缝子レベルでprove できた. 3. Micrococcus luteus B-P 26のヘキサプレニdirin acid (C_<30>-PP) synthesis enzyme 缝子のクローニング2のoccasionと同様のプライマーを用いて、PCRやサザンバイブリゼC_<30>-PP Synthetic Enzyme Suyidenzi およびC_<15>-PP synthesis enzyme 缝子のクローンに成した. C_<30>-PP synthesis enzyme is often dissociated and the structure is maintained and the proof is made.