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遺伝子機能阻害を基礎としたアミノ酸の情報伝達機構の解析

基于基因功能抑制的氨基酸信息传递机制分析

基本信息

批准号：
18658053
负责人：
加藤久典
金额：
$ 2.18万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度の研究において、転写因子ATF-4およびボスファターゼPP1cのノックダウンがアミノ酸情報伝達を減弱させることを見いだした。本年度はこれらのさらに上流に位置する伝達経路の関与を明確にする目的で、mTOR経路の上流因子として最近見いだされたhvps34と、これを調節することが示唆されているp150に着目した。ノックダウン効率の検討では、HEK293細胞において、hvps34のmRNAレベルは約30%に、タンパク質レベルは約40%に減少した。一方HepG2においても同程度のノックダウン効率を得ることができた。何れの細胞株においても、p150のmRNAは約30%に減少した。アミノ酸によるmTORの下流にあるp70S6キナーゼのリン酸化はhvps34とp150の何れのノックダウンよっても大きく減弱した。これらのことから、各細胞におけるアミノ酸シグナルの認識にvps34が関わっていることを明らかにし、認識機構の全貌解明に本実験系が有効であることが示された。一方、前年のDNAマイクロアレイによる解析で、ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ(PEPCK)の遺伝子をアミノ酸欠乏に対する高応答遺伝子として見いだしたが、この遺伝子の上流域に既知のアミノ酸応答配列に類似した配列が存在することがわかった。この領域を含むレポーターベクターを作成し、転写因子ATF-3やATF-4と共発現させたところ、この領域がこれら因子によって強力な制御を受けていることが示された。このことから、PEPCKはこれまで用いてきたIGFBP-1同様にアミノ酸情報伝達を解析する上での有用なツールとして利用できることがわかった。

Last year's research, において, 転WRAP factor ATF-4 およびボスファターゼPP 1cのノックダウンがアミノ acid information 伝达を weakened させることを见いだした. This year's upstream position, clear destination and mTOR upstream factorとして Recently met いだされたhvps34と, これをadjusted することがshows instigation されているp150に目した.ノックダウンefficiencyの検questionでは、HEK293 cellsにおいて、hvps34 The reduction rate of のmRNA レベルは is about 30%, and the タンパク quality レベルは is about 40%. HepG2 has the same level of efficiency as HepG2. In the cell lines of Hosukino, the p150 mRNA was reduced by about 30%. Amin acid によるmTOR no obscene にあるp70S6 キナーゼのリン acidification はhvps34とp150の何れのノックダウンよっても大きく weakenedした.これらのことから、each cell におけるアミノ acid シグナルのKnowing にvps34 わっていることを明らかにし、Know the full picture of the organization and explain it clearly and effectively. One side, DNA analysis of the year before last, ホスホエノールピルビン acid カルボキシキナーゼ(PEPCK)の缝子をアミノ sour无に対する高応舜蝝子として见いだしたが、この缝子の Upper BasinにIt is known that the のアミノ acid 応濜组に is similar to the した配线がexistent することがわかった.この区をcontains むレポーターベクターを成し, and the writing factor ATF-3 and ATF-4 are now co-producedさせたところ、この区がこれらfactorによってstrongなcontrolをReceivedけていることがshowされた.このことから、PEPCKはこれまで用いてきたIGFBP-1 Same as 様にアミノAcid information 伝达をanalyticsする上での用なツールとしてutilizationできることがわかった.