B型肝炎ウイルスS粒子形成能を利用した異種蛋白のS粒子表面上での発現と応用

利用乙型肝炎病毒S颗粒形成能力在S颗粒表面表达异源蛋白及应用

基本信息

批准号：
18659130
负责人：
上田啓次
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Hamamatsu University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659130/
关键词：
HBs 粒子形成異種蛋白ワクチン創成万能型 HBV ワクチン

项目摘要

B型肝炎ウイルス(HBV)のHBs蛋白はひじょうに効率よく分泌され粒子を形成することが知られている。本性質を利用し粒子表面上に異種蛋白を発現し様々な抗原に対応可能な万能型ワクチン創成技術開発へ応用することを考案した。このようなことが実際可能かどうかを確認するため異種蛋白としてはヒスチジンヘキサマー-Express(His6-Exp)タグを用いて,分泌シグナルが存在するとされるHBsN末約20アミノ酸を残しその後に続く親水性部分に挿入するタイプや単純にN末に融合させるタイプなどのうち,どのような構築が最適か更なる検討を培養細胞系で検討した。その結果HBsのORFの5'に単純に融合する(His6-Exp-HBs)ことが最適であることが解った。本発現ベクターを培養細胞へトランスフェクションし一過性発現系及び安定発現系にて培養上清を回収した。培養上清中に分泌されたHis6-Exp-HBs蛋白がNiNTA(His6アフィニティー担体)アガロースで回収・濃縮されることを確認した。更にスークロース密度勾配遠心で比重1.15〜1.18g/m1に集積することを確認した。これらの結果はHis6-Exp-HBsが粒子を形成していることを示している。粒子形成能を更に具体的に示すため電顕レベルでの粒子の証明,免疫原性を証明するためのマウスへの接種実験が進行中である

肝炎病毒（HBV）HBS蛋白被称为非常有效分泌并形成颗粒。使用该特性，我们设计了将其应用于开发技术的想法，该技术用于创建可以在颗粒表面表达异源蛋白质的通用疫苗，并可以对各种抗原做出反应。为了确认这是否确实可能是可能的，异源蛋白是一种组氨酸六聚体表达式（HIS6-EXP）标签，并对培养的细胞系进行了进一步的研究，以确定最佳结构，包括大约20种HBSN末端的氨基酸的类型，据说HBSN末端具有一个秘密信号，在该类型中仅仅在秘密的信号中均可置身于水文中。结果表明，简单地将其与HBS的5'ORF（His6-Exp-Hbs）融合在一起是最佳的。将该表达载体转染到培养的细胞中，并使用瞬态和稳定的表达系统收集培养的上清液。有人确认，在培养物中分泌的HIS6-Exp-HBS蛋白被收集并用Ninta（His6亲和载体）琼脂糖浓缩。此外，可以通过蔗糖密度梯度离心确认该浓度的比重为1.15至1.18 g/m1。这些结果表明HIS6-EXP-HBS形成颗粒。正在进行有关小鼠的接种实验，以证明在电子显微镜水平上的颗粒形成能力并证明免疫原性。

项目成果

期刊论文数量（5）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

KSHVの遺伝子とその産物.ヘルペスウイルス学-基礎・臨床研究の進歩

KSHV基因及其产物。疱疹病毒学-基础与临床研究进展

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
日本臨床 64
影响因子：
0
作者：
矢田佳織;大崎恵理子;上田啓次
通讯作者：
上田啓次

KSHV RTA induces a transcriptional repressor, HEY1 that represses rta promoter.

DOI：
10.1016/j.bbrc.2006.04.092
发表时间：
2006-06
期刊：
Biochemical and biophysical research communications
影响因子：
3.1
作者：
Kaori Yada;E. Do;S. Sakakibara;Eriko Ohsaki;E. Ito;Shinya Watanabe;K. Ueda
通讯作者：
Kaori Yada;E. Do;S. Sakakibara;Eriko Ohsaki;E. Ito;Shinya Watanabe;K. Ueda

HBsペプチド融合体

HBs 肽融合