B型肝炎ウイルスS粒子形成能を利用した異種蛋白のS粒子表面上での発現と応用

利用乙型肝炎病毒S颗粒形成能力在S颗粒表面表达异源蛋白及应用

• 批准号: 18659130
• 负责人: 上田 啓次
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Hamamatsu University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659130/
• 关键词: HBs; 粒子形成; 異種蛋白; ワクチン創成; 万能型; HBV; ワクチン

B型肝炎ウイルス(HBV)のHBs蛋白はひじょうに効率よく分泌され粒子を形成することが知られている。本性質を利用し粒子表面上に異種蛋白を発現し様々な抗原に対応可能な万能型ワクチン創成技術開発へ応用することを考案した。このようなことが実際可能かどうかを確認するため異種蛋白としてはヒスチジンヘキサマー-Express(His6-Exp)タグを用いて,分泌シグナルが存在するとされるHBsN末約20アミノ酸を残しその後に続く親水性部分に挿入するタイプや単純にN末に融合させるタイプなどのうち,どのような構築が最適か更なる検討を培養細胞系で検討した。その結果HBsのORFの5'に単純に融合する(His6-Exp-HBs)ことが最適であることが解った。本発現ベクターを培養細胞へトランスフェクションし一過性発現系及び安定発現系にて培養上清を回収した。培養上清中に分泌されたHis6-Exp-HBs蛋白がNiNTA(His6アフィニティー担体)アガロースで回収・濃縮されることを確認した。更にスークロース密度勾配遠心で比重1.15〜1.18g/m1に集積することを確認した。これらの結果はHis6-Exp-HBsが粒子を形成していることを示している。粒子形成能を更に具体的に示すため電顕レベルでの粒子の証明,免疫原性を証明するためのマウスへの接種実験が進行中である

Hepatitis B virus (HBV) and HBs protein are secreted at a high rate. This property makes use of the heterogeneous protein on the surface of the particle to develop a new type of antigen. The heteroprotein was identified as a possible fusion protein and expressed in a 6-Exp (His6-Exp) medium, secreted in a 20-amino acid residue, and then hydrophilic in a purified cell line. The result is that the ORF of HBs is 5'pure fusion (His6-Exp-HBs). The present invention relates to a transient development system and a stable development system of cultured cells. His6-Exp-HBs protein was secreted from culture supernatant and confirmed as NiNTA(His6-Exp-HBs). In addition, it is confirmed that the density of the sample is matched with the telecentric specific gravity of 1.15 ~ 1.18g/m1. His6-Exp-HBs particle formation is the result. Particle formation can be demonstrated in more detail, and the particles can be demonstrated in more detail. Immunogenicity can be demonstrated.

项目成果

KSHVの遺伝子とその産物.ヘルペスウイルス学-基礎・臨床研究の進歩

KSHV基因及其产物。疱疹病毒学-基础与临床研究进展

• 发表时间: 2006
• 期刊: 日本臨床 64
• 作者: 矢田佳織;大崎恵理子;上田啓次
• 通讯作者: 上田啓次

HBsペプチド融合体

HBs 肽融合

• 发表时间: 2008

KSHV RTA induces a transcriptional repressor, HEY1 that represses rta promoter.

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2006.04.092
• 发表时间: 2006-06
• 期刊: Biochemical and biophysical research communications
• 影响因子: 3.1
• 作者: Kaori Yada;E. Do;S. Sakakibara;Eriko Ohsaki;E. Ito;Shinya Watanabe;K. Ueda

Lack of a Mechanism of Faithful Partition and Maintenance for the KSHV Genome.

KSHV 基因组缺乏忠实分区和维护的机制。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Virus Research 122
• 作者: Ueda;K.;Sakakibara;S.;Ohsaki;E.;Yada;K.
• 通讯作者: K.

KSHVの潜伏感染と再活性化機構.ヘルペスウイルス学-基礎・臨床研究の進歩-

KSHV潜伏感染及再激活机制.疱疹病毒学-基础与临床研究进展-

• 发表时间: 2006
• 期刊: 日本臨床 64
• 作者: 大崎恵理子;矢田佳織;上田啓次
• 通讯作者: 上田啓次