アドレノメデュリン受容体の役割の解明と臨床応用を目指した新たな手段の確立

阐明肾上腺髓质素受体的作用并建立临床应用新手段

• 批准号: 18659231
• 负责人: 江藤 胤尚
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: University of Miyazaki
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659231/
• 关键词: アドレノメデュリン; 受容体; シグナル伝達; 低分子化合物; 臨床応用

(1)アドレノメデュリン(AM)受容体を選択的かつ強力に抑制する手段の確立:AM受容体は3種の受容体活性調節蛋白(RAMP)とカルシトニン受容体様受容体(CRLR)とで構成される。我々はその構成蛋白の遺伝子をHEK-293細胞に共発現させ、受容体複合体の良質な安定発現系を3種樹立した(CRLR/RAMP1,CRLR/RAMP2,CRLR/RAMP3)。これらの安定発現系に添加すべく循環系の組織抽出液(ブタ左心房、左心室、肺、腎臓、副腎)大量に獲得した。今後、1251-AMの結合を抑制する分画を順次精製し、最終的にAM受容体のペプチド性アンタゴニスト(新規)を同定したい。さらに、AMの受容体への結合を抑制するブロッキング抗体や各RAMPの構成蛋白の合成を阻害するsiRNA(低分子干渉RNA)を作製中である。(2)AMの細胞内シグナル伝達を特異的に増強かつ持続させる手段の確立:CRLRの細胞内シグナリングを著明に増加させるヒトRAMP1の1塩基置換体の同定に成功した。他のRAMPやCRLRでも検討中である。我々は、リガンド依存性に細胞内移行したAM受容体がいずれも細胞膜に再分布せずにライソゾームに集積することを見出した。AM受容体の分解系への誘導を強力に抑制する受容体構成蛋白の変異体を同定すべく、各RAMPの細胞内領域を欠如させて検討したが、CRLRの分解系への誘導は解除されなかった。現在、CRLRの細胞内領域(3つの細胞内ループおよびC末端領域)を標的にした系統的な変異体を多数作製して、AM受容体を分解系に誘導するCRLRの責任領域を絞り込みつつある。加えて、ライソゾームと深く関わっているRab7蛋白の機能をほぼ完全に抑制するドミナントネガティブ遺伝子を2種作製して、それらの安定発現系を樹立した。今後、この系を用いて、各CRLR/RAMP複合体の細胞内動態に及ぼす影響を詳細に検討する予定である。(3)新規AM受容体の系統的探索:まず、上記のAM受容体を抑制する手段を用いてもAMの効果が抑制されない摘出血管や培養細胞を系統的に探索する。

(1)The establishment of strong inhibition means for the selection of AM receptor:AM receptor consists of three kinds of receptor activity regulatory proteins (RAMP) and receptor receptor (CRLR). Three systems (CRLR/RAMP1,CRLR/RAMP 2,CRLR/RAMP3) were established for the co-development of protein components and receptor complexes in HEK-293 cells. This stability is achieved by adding tissue extracts from the circulatory system (left atrium, left ventricle, lungs, kidneys, accessory kidneys) in large quantities. In the future, the combination of 1251-AM will be refined in sequence, and the final AM receptor selection will be determined in the same way. In addition, siRNA(low molecular weight RNA) is used to inhibit the binding of AM receptors and inhibit the synthesis of RAMP constituent proteins. (2)AM Establishment of a method for enhancing the specificity of CRLR intracellular protein expression: identification of RAMP1-based substitutions His RAMP LR I'm not going to be able to do that. The induction of AM receptor breakdown system was strongly inhibited, and the induction of CRLR breakdown system was inhibited. Now, CRLR's intracellular domain (3 intracellular domains and C-terminal domains) is targeted at most of the system's heterogeneous mechanisms, and AM receptor decomposition systems are induced by CRLR's responsible domain. The function of Rab7 protein was completely inhibited by the addition of protein and protein, and the stable development system of Rab7 protein was established. In the future, the intracellular dynamics and effects of CRLR/RAMP complexes will be discussed in detail. (3)New regulations for AM receptor system exploration: the use of AM receptor inhibition methods, as described above, for AM receptor inhibition and vascular culture system exploration

项目成果

Functions of the cytoplasmic tails of the human receptor activity-modifying protein components of calcitonin gene-related peptide and adrenomedullin receptors

• DOI: 10.1074/jbc.m511147200
• 发表时间: 2006-03-17
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Kuwasako, K;Cao, YN;Kitamura, K
• 通讯作者: Kitamura, K