siRNAを用いた早期エンドゾーム中のプリオン複製補助因子の探索

使用 siRNA 搜索早期内体中的朊病毒复制辅因子

• 批准号: 18659253
• 负责人: 堂浦 克美
• 金额: $ 2.37万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659253/
• 关键词: 早期エンドゾーム; RNA干渉; スクリーニング; プリオン; 異常型プリオン蛋白; 構造変換; 感染細胞; 複製増殖支援因子

感染因子プリオンの複製増殖(すなわち正常型プリオン蛋白から異常型プリオン蛋白への立体構造変換)に関与するプレーヤーとしては、いまだにプリオン蛋白以外のものについてはよくわかっていない。本研究では、プリオン複製増殖の場と考えられている早期エンドゾーム細胞膜で発現している分子をsiRNAノックダウン法でスクリーニングを行い、プリオンの複製増殖に関わるプリオン蛋白以外のプレーヤーについて手がかりを得ようとした。3年間で約150種の分子について、プリオン持続感染細胞においてRNA干渉を用いて調べた。一次スクリーニングではプラスミド型shRNAを用いて検討を行い、異常型プリオン蛋白の産生低下をもたらしたものについて新たな配列を設計したり、化学合成siRNAを用いたりするなどして二次スクリーニングを行った。その結果、2つの分子が見つかったので、レスキュー実験等により入念に特異性を確認した。一つは、GABAA受容体サブユニットβ1で、β1以外の他のサブユニットに関する検討や各種GABAA受容体作用化合物についてさらに検討した。その結果、GabrblのGABAA受容体と関係しない別の機能がプリオンの産生に関与していることが強く示唆された。もう一つは、ある多機能受容体蛋白質で、この蛋白質の阻害蛋白質を発現誘導するとプリオンの産生が低下した。ことより、この蛋白質と阻害蛋白質の両者がプリオン産生を調整していることが示唆された。プリオンの複製増殖に関与するプリオン蛋白以外のプレーヤー候補として上記の2つの分子を発見することができ、当初の目標を達成した。

Infection factor プ リ オ ン の copy rights colonization (す な わ ち normal type プ リ オ ン protein か ら exception type プ リ オ ン protein へ の three-dimensional structure variations in) に masato and す る プ レ ー ヤ ー と し て は, い ま だ に プ リ オ ン protein outside の も の に つ い て は よ く わ か っ て い な い. This study で は, プ リ オ ン copy rights colonization と の field test え ら れ て い る early エ ン ド ゾ ー ム membrane で 発 now し て い る molecular を siRNA ノ ッ ク ダ ウ ン method で ス ク リ ー ニ ン グ を い, プ リ オ ン の copy rights colonization に masato わ る プ リ オ ン protein outside の プ レ ー ヤ ー に つ い て hand が か り を must よ う と し た. Three years about 150 kinds of molecular に の で つ い て, プ リ オ ン hold 続 infected cells に お い て RNA dry involved を with い て adjustable べ た. A ス ク リ ー ニ ン グ で は プ ラ ス ミ ド type shRNA を with い て 検 type line for を い, abnormal プ リ オ ン protein の produce low を も た ら し た も の に つ い て new た な match column を design し た り, chemical synthesis of siRNA を with い た り す る な ど し て secondary ス ク リ ー ニ ン グ を line っ た. そ の results, 2 つ の molecular が see つ か っ た の で, レ ス キ ュ ー be 験 etc に よ り into read に specificity を confirm し た. A つ は, GABAA let body サ ブ ユ ニ ッ ト beta 1 で, beta 1 の he の サ ブ ユ ニ ッ ト に masato す る 検 for various GABAA や subjected to let body compound に つ い て さ ら に beg し 検 た. そ の results, Gabrbl の GABAA by let body と masato is し な い don't の function が プ リ オ ン の produce に masato and し て い る こ と が く and shown strong sucking さ れ た. も う a つ は, あ る function by で let body protein, more こ の protein の resistance against protein を 発 now induced す る と プ リ オ ン の produce low が し た. The <s:1> とよ とよ and the <s:1> <s:1> protein と inhibit the <s:1> of the <s:1> protein がプリ <s:1> to produce を adjustment of the を て る る る る とが inciting された. プ リ オ ン の copy rights colonization に masato and す る プ リ オ ン protein outside の プ レ ー ヤ ー alternate と し て written の 2 つ の molecular を 発 see す る こ と が で き, original の を fabricate し た.

项目成果

ヤコブ病克服プロジェクトの成果と課題-治療・発症機序研究

雅各氏病攻克项目的成果与挑战——治疗及发病机制研究

• 发表时间: 2008
• 作者: 石川謙介;堂浦克美;堂浦克美
• 通讯作者: 堂浦克美

Screening for endogenous factors involved in the formation of protease resistant prion protein.

筛选参与蛋白酶抗性朊病毒蛋白形成的内源因子。

• 发表时间: 2007
• 作者: Kimura T;Ishikawa K;Nishimura Y;Schatzl HM;Doh-ura K
• 通讯作者: Doh-ura K

HSP90 family proteins modify the comformation of copper-loaded prion protein in a nucleotide-dependent manner.

HSP90 家族蛋白以核苷酸依赖性方式修饰载铜朊病毒蛋白的构象。

• 发表时间: 2007
• 作者: Sakasegawa Y;Hachiya NS;Kaneko K;Doh-ura K
• 通讯作者: Doh-ura K

スクレイピーマウス血清中における疾患特異的蛋白質の検出

痒病小鼠血清中疾病特异性蛋白的检测

• 发表时间: 2008
• 作者: V.U. Ultra;A. Nakayama;S. Tanaka;Y. Kang;K. Sakurai;K. Iwasaki;戸邉美智子,宮庄 拓,野村幸子,伊藤暁史,松田一哉,川崎ゆり,堂浦克美,毛利資郎,横田 博
• 通讯作者: 戸邉美智子,宮庄 拓,野村幸子,伊藤暁史,松田一哉,川崎ゆり,堂浦克美,毛利資郎,横田 博

プリオン病の分子標的治療。

朊病毒疾病的分子靶向治疗。

• 发表时间: 2007
• 期刊: 神経研究の進歩 59(4)
• 作者: 逆瀬川裕二;堂浦克美
• 通讯作者: 堂浦克美