頭頚部癌細胞由来RNAAヘリカーゼのクローニングと機能解析

头颈癌细胞RNAA解旋酶的克隆及功能分析

• 批准号: 18659609
• 负责人: 山岡 稔
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Matsumoto Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659609/
• 关键词: 頭頸部癌; ヘリカーゼ; 遺伝子; クローニング

ヘリカーゼは、mRNAの巻き戻し(unwinding)を行う細胞増殖に必要な酵素で、癌細胞では蛋白合成や浸潤、転移に影響を与えると考えられる。癌細胞のRNAの巻き戻し作用とその後に生じる蛋白合成を抑制する阻害剤を開発すれば、新しい癌治療法が開発される。そこで、以下の手順で口腔扁平上皮癌細胞に由来するRNAヘリカーゼについて、1、頭頸部癌細胞由来のRNAヘリカーゼのDNA断片の単離、2、完全長cDNAをクローニング、3、抗体の作製、4、ライブラリーの作製、5、癌細胞由来ヘリカーゼ蛋白発現細胞の検討を行った。まず、頭頸部癌細胞(HSG)を無血清培養し、細胞抽出液および培養上清を回収した。その培養上清は、セントリコンプラス20で濃縮し、ゲル濾過カラム、イオン交換クロマトグラフィー、レクチンカラム、アフィニティカラムを用いてFPLCで最終分画した。精製蛋白は、フロイントアジュバントを用いてSPFウサギに免疫し、ヒトRNAヘリカーゼに対する抗血清を得た。抗体の有用性を抗原を試料としたウエスタンブロット法で確認したところ、約48kDaの蛋白バンドを得た。RNAヘリカーゼ活性の高い頭頸部癌培養細胞と正常細胞(ケラチノサイトまたは線維芽細胞)からAGPC法でtotal RNAを抽出し、オリゴdTカラムでmRNAを抽出した。微量核酸測定用分光光度計で260nm/280nmでmRNAを定量後、純度を確認してcDNAを合成した。UNIZAPIIファージベクターにスブクローニング後、in vivo excisionによりファージミドライブラリーとした。このファージライブラリーから抗体陽性プラークを採取した。このプラークより得たファージミドを用いて形質転換させた細胞では、細胞増殖と蛋白合成能が亢進することが明らかとなった。

The essential enzymes for cell colonization, protein synthesis, migration, and protein synthesis in cancer cells were detected by mRNA, unwinding, and so on. The synthesis of biosynthesis of RNA protein in cancer cells can inhibit the growth of cancer cells, and the new method of cancer treatment should be used to treat cancer. The origin of oral squamous cell carcinoma (RNA), the origin of oral cancer cells (1), the origin of cancer cells (RNA cells), DNA fragments (fragments), 2, full-length cDNA cells (3), antibodies (4), tumor cells (5), cancer cells (protein). The tumor cells (HSG), serum culture, cell extract and supernatant of cancer cells were detected. Please tell me that you need to use the FPLC to separate the pictures from each other. Protamine, protamine, antiserum, antiserum, SPF, RNA, immune, antiserum. Antibody "usefulness" Antigen material, Antigen material, Antigen, Antigen, Antigen, The activity of RNA was tested by total RNA method. The normal cells of cancer culture were detected by AGPC method, and the cells were extracted by mRNA. After the determination of trace nucleic acid was determined by spectrophotometry 260nm/280nm mRNA, the synthesis of nucleic acid was confirmed by cDNA. After UNIZAPII

项目成果

頭頸部癌における宿主免疫抑制機構

头颈癌的宿主免疫抑制机制

• 发表时间: 2007
• 作者: Furue;M.;Okamoto;T.;Sato;J.D.;他5名;Yagi Kazuko;木島 寛;Matsuyama Junko;Kijima Hiroshi;小林 千里;Kobayashi Chisato;山田 好秋 他;Naramoto H;Takashi Uematsu;Yang S;上松 隆司
• 通讯作者: 上松 隆司

Multidrug resistance-associated protein 7 expression is involved in cross-resistance to docetaxel in salivary gland adenocarcinoma cell lines.

• DOI: 10.3892/ijo.30.2.393
• 发表时间: 2007-02
• 期刊: International journal of oncology
• 影响因子: 5.2
• 作者: Hiroko Naramoto;T. Uematsu;T. Uchihashi;R. Doto;T. Matsuura;Y. Usui;S. Uematsu;Xianqi Li;Masahiro Takahashi;M. Yamaoka;K. Furusawa

Refractory Factors in Head and Neck Cancer: ATP Binding Cassette Transporters Expressed in Head and Neck Cancer Cell Lines.

头颈癌的难治因素：头颈癌细胞系中表达的 ATP 结合盒转运蛋白。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Oral Sci Int 3(2)
• 作者: Takashi Uematsu;Hiroko Naramoto;Ryosuke Doto;Takayuki Uchihashi;Takashi Matsuura;Yohei Usui;Setsuko Uematsu;Xianqi Li;Masahiro Takahashi;Minoru Yamaoka and Kiyofumi Furusawa
• 通讯作者: Minoru Yamaoka and Kiyofumi Furusawa