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口腔癌細胞由来RNAヘリカーゼのクローニングと機能解析

口腔癌细胞RNA解旋酶的克隆及功能分析

基本信息

批准号：
20659320
负责人：
山岡稔
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Matsumoto Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20659320/
关键词：
口腔癌ヘリカーゼクローニング頭頸部癌遺伝子

项目摘要

本研究は、浸潤転移能の高い癌細胞のRNAヘリカーゼを同定・クローニングして口腔癌治療における新たな分子標的療法を開拓する目的で行った。癌細胞に強く発現するペプチド抗原に対する抗体を作製した後、このペプチド抗原を発現するクローンを扁平上皮癌に由来するcDNAファージミドライブラリーを用いてスクリーニングした。分離したクローンからssDNAを精製してダイデオキシ法でcDNA塩基配列を決定した。塩基配列から推測されるアミノ酸配列を決定してホモロジー解析を行った。アラインメントの検索では,類似性の高い部分を局所的に検討するローカルアラインメントと、配列全体の類似性をみるグローバルアラインメントを行った。RNAヘリカーゼの細胞内局在の検討は口腔扁平上皮癌細胞の細胞内分布を免疫染色法で検討した。その結果、λphage-cDNAライブラリーから得られたクローンの遺伝子配列から推測される蛋白の分子量は85kDaでウイルスの外套蛋白の配列に類似した部分が存在した。このクローニングされた蛋白には9つのヘリカーゼモティーフが存在し、この部分はウイルスからヒトに至るまで54.3%の相同性を認めた。さらにローカルアラインメントではO-グリカナーゼ(α-N-acetylgalactosaminidase)と17.1%の相同性がみられた。免疫染色では、この蛋白は癌細胞の核内と細胞質の一部に存在した。特に核内への移動は細胞周期と関連していることが示唆された。これらは、1.正常細胞に比べ癌細胞に発現していること、2.細胞の増殖や蛋白合成に関わるヘリカーゼのモティーフを有すること、3.ウイルスエンベロープ蛋白にも存在していることなどから、本蛋白が癌遺伝子産物の形質を有すると考えられた。

This study aims to establish a new molecular target therapy for oral cancer by targeting RNA from highly invasive cancer cells. Cancer cells strongly express antigen-specific antibodies, which are used in the production of cDNA fragments from squamous cell carcinoma. Isolation and purification of ssDNA The base alignment is estimated to be the same as the base alignment. The similarity of the high part of the similarity is discussed in the similarity of the whole. The intracellular distribution of RNA in oral squamous cell carcinoma cells was studied by immunostaining. As a result, the λphage-cDNA sequence was found to be similar to that of the coat protein with a molecular weight of 85kDa. The identity of these two species is 54.3% and exists only in some of them. O-acetyl galactosaminase (α-N-acetylgalactosaminase) was found to be 17.1% identical. Immunostaining showed that the protein was present in part of the cytoplasm of the nucleus of cancer cells. In particular, nuclear migration is associated with the cell cycle. 1. normal cells are more likely to develop than cancer cells; 2. cell proliferation and protein synthesis are more likely to develop than cancer cells; 3. the protein is more likely to develop than cancer cells; and 4. the protein is more likely to develop than cancer cells.