遺伝子改変マウスを使用した大脳新皮質投射型GABA神経細胞の役割に関する研究

使用转基因小鼠研究新皮质投射 GABA 神经元的作用

• 批准号: 19650085
• 负责人: 玉巻 伸章
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19650085/
• 关键词: NOS; GABA; neocortex; projection; disinhibition; Chop2; Halorhodpsin; 光刺激; tet-on

作成したNOS-Cre/tet-onマウスとHA,Chop2-Cre-reporter mouseの作動確認:本研究では、すでに作成したnNOS-Cre/tet-onマウスとHA,Chop2-Cre-reporter mouseの作動が正確であるかどうかを確認した。それぞれのDNAコンストラクトは、ドキシサイクリン投与まではCreの働きを最低限に抑えられるようにcultured-cellで十分にモニター実験を繰り返したものであった。両者を掛け合わせ生まれたマウスが4週齢以上に成育して、興奮性神経細胞でのnNOS promoter活性が終息した段階に、ドキシサイクリンを常時飲水の中に添加して、bidirectional promoter上のrtTSサプレッサーを除き、rtTA2Mの結合を促してFlpeを発現させ、一週間程度の期間を掛けてnNOS陽性細胞にCreを発現させた。CreはloxPではさまれたmodified red fluorescent protein (mRFP) cDNAを除くことにより、HR,Chop2, YFPがCAG promoterの下流に来て、3つの蛋白発現が始まる事が期待された。さらに2-3日の生存期間をおいて灌流固定し、nNOSとGFPに対する二重免疫組織化学を行い、明らかなGFP陽性でnNOS陰性の細胞が無いことを期待していた。GFP陰性nNOS陽性の細胞は、tet-onからCreによるDNAの組み換えにいたらなかった場合であり、全てが二重染色になるようにドキシサイクリンの投与量と期間を調整した(全てのnNOS陽性細胞のレポーター標識)。しかし、現在までのところtet-on systemが予定通りの頻度で働いておらず、望む実験ができていない。

Youdaoplaceholder0 たNOS-Cre/tet-on ウスと ウスとHA,Chop2-Cre-reporter mouse confirmation: this study で ウスと, すでに produced ウスと たnNOS-Cre/tet-on ウスと ウスとHA,Chop2-Cre-reporter mouse to act が correct である う う を を confirm た た. そ れ ぞ れ の DNA コ ン ス ト ラ ク ト は, ド キ シ サ イ ク リ ン cast with ま で は Cre の 働 き を minimalist に え suppression ら れ る よ う に cultured - cell で very に モ ニ タ ー be 験 を Qiao り return し た も の で あ っ た. That struck the を hang け close わ せ raw ま れ た マ ウ ス が more than 4 weeks 齢 に into yukon し て, excitatory god 経 cell で の nNOS promoter activity が cessation し た Duan Jie に, ド キ シ サ イ ク リ ン を geomagnetic water の に added し て, bidirectional Promoter on の rtTS サ プ レ ッ サ ー を except き, rtTA2M の combining を promote し て Flpe を 発 now さ せ, during the week between degree の を hanging け て nNOS positive cells に Cre を 発 now さ せ た. Cre は loxP で は さ ま れ た modified red fluorescent protein (mRFP) cDNA を except く こ と に よ り, HR, Chop2, YFP が the CAG promoter の obscene に て, 3 つ の protein 発 が now beginning ま る matter が expect さ れ た. さ ら に 2-3 の survival during を お い て perfusion fixation し, nNOS と GFP に す seaborne る double immunohistochemical を い, Ming ら か な GFP positive で nNOS negative の cells が い こ と を expect し て い た. GFP positive negative nNOS の cell は, tet - on か ら Cre に よ る DNA み の group in え に い た ら な か っ た occasions で あ り, whole て が double staining に な る よ う に ド キ シ サ イ ク リ ン during と を の cast and quantity adjustment し た (full て の nNOS positive cells の レ ポ ー タ ー logo). し か し, now ま で の と こ ろ tet - on the system が designated general り の frequency で 働 い て お ら ず, む be 験 が で き て い な い.

项目成果

ドーパミン神経細胞の分離法

多巴胺能神经元的分离方法

• 发表时间: 2007

Exeess salt causes cerebral neuronal apoptosis and inflammation in stroke-pronehypertensive rats, through angiotensin II-induced NADPH oxidase activation.

过量的盐通过血管紧张素 II 诱导的 NADPH 氧化酶激活，导致易中风高血压大鼠的脑神经元凋亡和炎症。

• 发表时间: 2008
• 期刊: Strok (In press)
• 作者: Watanabe;S.;Blaisdell;A.;Huber;L.;Young;A.(編集);Tanahira C;I de Y;Kaneko K;Yamamoto E;Huang J;Basu K;Esumi S;Eiichiro Yamamoto
• 通讯作者: Eiichiro Yamamoto

Excess Salt Causes Cerebral Neuronal Apoptosis and Inflammation in Stroke-Prone Hypertensive Rats Through Angiotensin II-Induced NADPH Oxidase Activation

• DOI: 10.1161/strokeaha.108.517284
• 发表时间: 2008-11-01
• 期刊: STROKE
• 影响因子: 8.3
• 作者: Yamamoto, Eiichiro;Tamamaki, Nobuaki;Kim-Mitsuyama, Shokei
• 通讯作者: Kim-Mitsuyama, Shokei

5-HT3A receptor subunit is expressed in a subpopulation of GABAergic and enkephalinergic neurons in the mouse dorsal spinal cord

5-HT3A 受体亚基在小鼠背脊髓 GABA 能和脑啡肽能神经元亚群中表达

• DOI: 10.1016/j.neulet.2008.04.105
• 发表时间: 2008-08-15
• 期刊: NEUROSCIENCE LETTERS
• 影响因子: 2.5
• 作者: Huang, Jing;Wang, Ya-Yun;Wu, Sheng-Xi
• 通讯作者: Wu, Sheng-Xi

Method for single-cell microarray analysis and application to gene-expression profiling of GABAergic neuron progenitors

• DOI: 10.1016/j.neures.2007.12.011
• 发表时间: 2008-04-01
• 期刊: NEUROSCIENCE RESEARCH
• 影响因子: 2.9
• 作者: Esumi, Shigeyuki;Wu, Sheng-Xi;Tamamaki, Nobuald
• 通讯作者: Tamamaki, Nobuald